bar基因、pat基因检测

bar基因和pat基因是广泛应用于农业生物技术领域的两种关键功能基因，主要赋予转基因作物对草铵膦类除草剂的抗性。bar基因源自吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus），而pat基因则来源于绿僵菌（Streptomyces viridochromogenes），二者均编码膦丝菌素乙酰转移酶（PAT）。该酶通过乙酰化作用使除草剂活性成分失活，是现代抗除草剂作物的核心遗传元件。随着转基因作物的商业化种植规模扩大，对这两种基因的精准检测已成为确保食品安全、环境安全和国际贸易合规的关键环节。根据国际食品法典委员会（CAC）指南及各国转基因标识法规，对含bar/pat基因产品的检测需严格遵循标准化的分子生物学流程，涵盖从核酸提取到结果判定的全流程质量控制。

检测项目

针对bar基因和pat基因的核心检测项目包括：

• 基因定性检测 - 确认样品中是否含有目标基因序列
• 拷贝数定量分析 - 测定转基因成分在样品中的相对含量
• 启动子/终止子元件验证 - 检测CaMV 35S启动子或NOS终止子等调控元件
• 品系特异性检测 - 鉴别特定转基因事件（如BarStar玉米、LibertyLink油菜）

检测仪器

检测过程需使用专业分子生物学设备：

• 核酸提取系统： 全自动核酸提取仪（如QIACube）、冷冻离心机
• 扩增检测平台： 实时荧光定量PCR仪（qPCR，如ABI 7500）、数字PCR仪（ddPCR）
• 电泳分析设备： 凝胶成像系统、毛细管电泳仪（如QIAxcel）
• 辅助设备： 超低温冰箱（-80℃）、生物安全柜、超纯水系统

检测方法

主要采用三类标准化检测技术：

1. 实时荧光定量PCR法（qPCR）

• 设计特异性引物/探针（如bar-F:5'-CTGCACCATCGTCAACCAC-3'；bar-R:5'-CAGATCTCGGTGACGGGCAG-3'）
• 建立双重PCR体系同步检测内参基因（如zSSIIb）与目标基因
• 通过Ct值阈值循环进行相对定量分析

2. 数字PCR法（ddPCR）

• 将反应体系分割为20,000个微滴
• 采用EvaGreen染料或TaqMan探针检测体系
• 通过泊松分布统计实现绝对定量，灵敏度达0.1%

3. 侧向层析试纸条法（LFD）

• 使用金标抗PAT单克隆抗体
• 10分钟内完成蛋白水平的快速筛查
• 适用于现场初筛，检测限约50ng/g

检测标准

检测过程严格遵循国际国内标准体系：

• 国际标准： ISO 21569:2019（核酸提取方法）、ISO 21570:2005（定量方法）
• 国家标准： GB/T 19495.5-2018（实时荧光PCR方法）、SN/T 1195-2019（检测规程）
• 方法验证要求： 检测限≤0.1%、扩增效率90-110%、R²≥0.98
• 质控规范： 每批次需包含阴性/阳性对照及空白对照，重复检测变异系数≤25%

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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