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猪源性检测

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发布时间：2025-07-19 11:19:05 更新时间：2025-07-18 11:19:05

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

猪源性检测概述

猪源性检测是指通过特定的技术手段，对食品、饲料、药品、化妆品、皮革制品或其他生物材料中是否含有猪源性成分进行定性或定量分析的过程。这项检测具有极其重要的现实意义：首先，在全球范围内，伊斯兰教、犹太教等宗教严格禁止食用猪肉及其制品，确保产品无猪源性成分是尊重宗教信仰和满足特定消费群体的基本要求；其次，部分人群对猪肉存在严重过敏反应，明确标识猪源性成分是保障消费者健康与知情权的关键措施；再者，在食品安全监管、物种保护（如防止濒危猪种非法贸易）、法医鉴定以及反欺诈（如以低价肉冒充高价肉）等领域，精确的猪源性溯源技术发挥着不可替代的作用。因此，建立灵敏、准确、高效的猪源性检测体系是保障市场秩序、维护消费者权益和促进国际贸易顺畅进行的重要技术支撑。

随着全球化贸易的发展和食品供应链的日益复杂，原料来源交叉污染的风险增加，对猪源性成分进行严格监控的需求也日益迫切。现代检测技术已能实现从痕量水平（如DNA片段）到宏观成分（如蛋白质）的精准识别。

主要检测项目

猪源性检测的核心目标是特异性识别猪（Sus scrofa domestica）的生物学标记物。主要检测项目包括：

1. 物种特异性DNA序列检测： 这是目前最主流和应用最广泛的方法。通过检测猪特有的基因片段（如线粒体DNA中的细胞色素b基因、D-loop区，或核基因中的生长激素基因、特定微卫星标记等）来确认猪源性成分的存在。

2. 物种特异性蛋白质检测： 主要针对猪肌肉或其他组织中的特征性蛋白质（如肌红蛋白的特定变体、胶原蛋白类型等）进行免疫学分析。适用于热加工后DNA可能严重降解的样品。

3. 猪源性成分定量分析： 在部分需要了解污染程度或掺假比例的场合（如混合肉制品），需要进行定量检测，确定猪源性成分在样品中的含量百分比。

常用检测仪器

猪源性检测依赖于一系列精密的实验室仪器设备：

1. 聚合酶链式反应仪： 用于扩增目标DNA片段，是DNA检测法最核心的设备。包括常规PCR仪和实时荧光定量PCR仪。实时荧光定量PCR仪能实现DNA的定性和定量分析，灵敏度高，应用最为广泛。

2. 核酸提取系统/工作站： 用于从复杂样品基质（肉、饲料、加工食品等）中高效、稳定地提取和纯化DNA。

3. 电泳系统： 用于常规PCR扩增产物的分离和初步可视化（凝胶成像系统）。

4. 实时荧光定量PCR检测系统： 集成了温控模块、光学检测模块和数据分析软件，用于实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，实现高灵敏度、高特异性的定性和定量检测。

5. 酶联免疫吸附测定仪： 用于基于蛋白质的免疫学检测（如ELISA法），包括酶标仪、洗板机等。

6. 测序仪： 当需要更高特异性的确认或开发新方法时，用于对扩增的DNA片段进行测序分析。

7. 质谱仪： 用于基于蛋白质或多肽指纹图谱的检测方法（如MALDI-TOF MS）。

核心检测方法

根据检测靶标（DNA或蛋白质）的不同，主要方法如下：

1. 基于DNA的检测方法：

聚合酶链式反应： 最常用和最成熟的方法。
- 常规PCR：扩增猪特异性DNA片段，通过琼脂糖凝胶电泳观察条带判断结果。操作相对简单，成本较低。
- 实时荧光定量PCR： 在PCR反应体系中加入特异性荧光探针（如TaqMan探针）或荧光染料，实时监测扩增过程。具有更高的特异性、灵敏度，能实现绝对或相对定量，且闭管操作减少污染风险，是目前的主流和推荐方法。
- 多重PCR：同时检测多个物种（如猪、牛、羊、鸡等），提高检测效率。
DNA测序： 对PCR产物进行测序，与数据库比对，提供最确凿的物种鉴定证据。
环介导等温扩增： 在恒定温度下进行核酸扩增，对设备要求较低，适合现场快速筛查。

2. 基于蛋白质的检测方法：

酶联免疫吸附测定： 利用抗猪特异性蛋白质（如肌红蛋白、胶原蛋白）的抗体进行检测。操作相对简便，对深加工、DNA可能降解的样品有一定优势，但灵敏度和特异性通常低于DNA方法，且可能受物种间蛋白质同源性干扰。
免疫层析试纸条： 快速检测方法，常用于现场初筛，但灵敏度和准确性有限。
质谱技术： 通过分析特征性肽段指纹图谱来识别物种。精度高，但成本高昂，操作复杂，应用不如PCR普及。

主要检测标准

为确保检测结果的准确性、可靠性和可比性，国内外均制定了相应的标准方法：

1. 中国国家标准/行业标准：
SN/T 2051-2008 《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法》
SN/T 3731.4-2013 《食品及饲料中常见畜禽类成分的检测方法第4部分：貂成分检测实时荧光PCR法》(该系列标准包含猪、牛、羊、鸡、貂等)
GB/T 20190-2006 《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法》 (虽主要针对牛羊，方法学原理类似，部分实验室会参考或建立针对猪的PCR方法)
农业农村部及国家市场监督管理总局等也会发布相关公告和检测方法指南。

2. 国际标准：
ISO 21571:2005 《食品. 基因改良生物和衍生产品检测的分析方法. 核酸提取》 (提供通用的核酸提取指南，适用于猪源性检测前处理)
ISO 20838:2006 《食品. 微生物学. 食品病原体检测用聚合酶链反应（PCR）. 扩增和检测要求》 (提供PCR检测的通用规范)
尽管没有专门针对猪源性定量的单一ISO标准，但实时荧光定量PCR的方法学遵循ISO 22118:2011, ISO 22119:2011等关于食品和饲料中病原体核酸检测的PCR标准原则。

3. 区域性/国家性法规要求：
欧盟、美国、中东等国家和地区对清真食品、食品标签、饲料安全等有严格规定，强制要求进行物种源性成分检测（包括猪源性），并认可符合其法规要求的检测方法（通常基于标准化的实时荧光PCR或ELISA）。

选择标准的关键点： 实验室在选择检测方法时，应优先采用国家或国际公认的、经过验证的标准方法，并确保方法的特异性（只检出猪）、灵敏度（能检出痕量成分）、稳健性（抵抗样品基质干扰）符合监管或客户要求。实时荧光定量PCR法因其综合性能优越，在绝大多数标准中被列为首选方法。