实验动物寄生虫检测
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发布时间:2025-07-21 09:37:39 更新时间:2025-07-20 09:37:39
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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在生物医学研究中,实验动物的健康状态是获得可靠、可重复实验结果的基础保障。实验动物寄生虫感染是一个普遍存在且不容忽视的问题。寄生虫的存在不仅直接影响动物自身的生长发育、繁殖性能、免疫功能和福利状况,导致疾病甚至死亡,还会严重干扰实验数据的准确性和科学性。例如,某些寄生虫的代谢产物、组织损伤或引起的免疫反应,会改变宿主的生理生化指标、药物代谢动力学、免疫应答等关键研究参数,导致实验结果的偏差或错误解读。因此,对实验动物进行严格的、定期的寄生虫检测,是实验动物质量控制体系中至关重要的一环,是确保实验动物质量符合SPF(无特定病原体)或无特定寄生虫等级要求,进而保障生物医学研究质量与生物安全的必要手段。
实验动物寄生虫检测项目主要针对两大类寄生虫及其相关发育阶段:
1. 体外寄生虫:主要寄生于动物体表及被毛中。 * 螨虫:如鼠螨、兔螨、疥螨、蠕形螨等,引起皮炎、脱毛、搔痒。 * 虱、蚤:如啮毛虱、跳蚤等,吸血、引起刺激和不适。 * 蜱:虽较少见,但危害大。
2. 体内寄生虫:主要寄生于动物体内各器官和组织。 * 蠕虫: * 线虫:如管状线虫(鼠)、四翼无刺线虫(鼠)、栓尾线虫(兔、啮齿类)、蛲虫(猴)、蛔虫(犬、猴)、鞭虫(猴)、旋毛虫(猪、啮齿类)、广州管圆线虫(猴)、肝毛细线虫等。 * 绦虫:如膜壳绦虫(啮齿类)、犬复孔绦虫(犬、猫)、豆状囊尾蚴(兔)等。 * 原虫: * 肠道原虫:如贾第鞭毛虫、球虫(艾美耳球虫、等孢球虫等)、小袋纤毛虫、隐孢子虫、阿米巴原虫(溶组织内阿米巴、结肠内阿米巴等)、六鞭毛虫、毛滴虫等。 * 血液/组织原虫:如弓形虫、卡氏肺孢子虫(虽常归类为真菌,但检测方法类似)等。 * 虫卵/卵囊/包囊:在粪便中检测蠕虫虫卵或原虫卵囊/包囊是重要的间接诊断依据。
寄生虫检测依赖于多种实验室仪器设备:
1. 显微镜:是寄生虫形态学检测的核心工具。 * 光学显微镜(含油镜):用于观察粪便涂片、组织压片/切片、血液涂片中的虫体、虫卵、卵囊、包囊、滋养体等,进行形态学鉴定。 * 体视显微镜(解剖镜):用于检查动物体表、被毛中的体外寄生虫(如虱、蚤、螨),也可用于检查肠道内容物或组织中的较大蠕虫。
2. 离心机:用于粪便样本的离心沉淀或漂浮浓缩处理,提高虫卵/卵囊的检出率。
3. 恒温培养箱:用于特定原虫(如球虫卵囊)的孢子化培养。
4. 聚合酶链式反应仪(PCR仪):用于进行寄生虫特异性核酸(DNA/RNA)的扩增,是分子生物学检测的核心设备,具有高灵敏度和特异性。
5. 酶联免疫吸附测定仪(ELISA Reader/Washer):用于检测动物血清或粪便中的寄生虫特异性抗体或抗原。
6. 切片机及染色设备:用于制作组织病理学切片(石蜡或冷冻切片),通过特殊染色(如HE染色、Gram染色、银染、抗酸染色等)观察组织内的虫体或病变。
7. 基本实验室设备:如天平、磁力搅拌器、移液器、水浴锅/金属浴、生物安全柜、冰箱/冰柜、消毒设备等。
根据检测目标的不同,主要采用以下方法:
1. 体外寄生虫检测: * 直接检查法:肉眼或借助体视显微镜仔细检查动物体表、被毛、耳廓、趾间、肛门周围等部位,寻找成虫、虫卵或皮屑中的螨虫。常用透明胶带粘取法或拔毛检查法。 * 皮肤刮屑检查:对疑似螨虫感染的部位进行刮皮,将皮屑置于载玻片上,加甘油或氢氧化钾溶液透明后镜检。
2. 体内寄生虫检测 - 粪便检查(主要针对肠道寄生虫): * 直接涂片法:取少量新鲜粪便与生理盐水混合涂片,直接镜检寻找活的原虫滋养体、包囊、虫卵。简便快速,但检出率低。 * 饱和盐水漂浮法:利用饱和盐水高比重使虫卵/卵囊漂浮集中到液面。是检查线虫卵、绦虫卵、球虫卵囊等的常用方法。 * 沉淀法(自然沉淀法/离心沉淀法):利用虫卵/包囊比重大的特性,经水洗自然沉淀或离心后收集沉渣镜检。对吸虫卵、棘头虫卵、原虫包囊效果好。 * 浓集法:如甲醛-乙酸乙酯沉淀法(又称MIFC或FECT法),能同时浓集多种虫卵、包囊、卵囊,效果较好。 * 染色法:如卢戈氏碘液染色(染原虫包囊)、抗酸染色(染隐孢子虫卵囊)、三色染色(染原虫)等,提高形态辨识度。 * 培养法:如球虫卵囊的孢子化培养,有助于虫种鉴定。
3. 体内寄生虫检测 - 血液/组织检查: * 血液涂片染色镜检:如吉姆萨或瑞氏染色,检查血液中疟原虫、锥虫、巴贝斯虫等。 * 组织压片/切片镜检:取可疑组织(如肺、肝、肠、肌肉)做压片或病理切片,染色后镜检寻找虫体或特征性病变(如旋毛虫囊包、弓形虫包囊/假包囊、肺孢子虫)。 * 组织匀浆镜检:如检查肺组织中的肺孢子虫。
4. 免疫学检测: * 酶联免疫吸附试验:检测血清中的寄生虫特异性抗体(如弓形虫IgG/IgM、旋毛虫抗体)或粪便/血液中的特异性抗原(如贾第鞭毛虫抗原、隐孢子虫抗原)。 * 免疫荧光试验:检测组织或粪便样本中的寄生虫抗原。 * 胶体金免疫层析试纸条:快速检测某些寄生虫(如弓形虫、旋毛虫)的抗体或抗原。
5. 分子生物学检测: * 聚合酶链式反应:检测寄生虫特异性核酸片段。具有极高的灵敏度和特异性,可用于诊断(尤其对难以镜检或培养的虫种,如隐孢子虫、弓形虫、微孢子虫等)、虫种鉴定和分子流行病学研究。包括常规PCR、巢式PCR、实时荧光定量PCR等。
实验动物寄生虫检测必须遵循国家和国际相关的标准规范,确保检测的科学性、规范性和结果的可靠性。主要标准包括:
1. 国家标准(中国): * GB 14922.1-2001《实验动物 寄生虫学等级及监测》:这是核心标准。明确规定了普通级、清洁级、SPF级和无菌级实验动物的寄生虫学等级要求、检测项目(必须检测和必要时检测的寄生虫种类)、检测程序(取样数量、频率、方法)以及结果判定规则。最新版本已
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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