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IFITM6敲除小鼠_模型

发布时间:2025-07-25 08:49:03·浏览:29 次

检测周期 7-15 个工作日 加急可与工程师沟通
检测资质 旗下实验室 CMA CNAS 具有法律效力,可查验
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咨询报价 400-625-0567 工程师 1 对 1 定制方案
资源中文名称 IFITM6敲除小鼠_
资源英文名称 IFITM6 gene knockout mice
疾病概述 固有免疫是机体防御外来病毒感染的第一道防线,通过识别病原并产生各种细胞因子、趋化因子、干扰素(IFN)等多种抗病毒因子。干扰素诱导的跨膜蛋白(IFITM家族),是一类具有抗病毒作用的ISG(干扰素诱导基因)的编码产物,并证明其在多种生物过程中发挥作用,具有广泛的抗病毒作用,并在免疫信号转导、细胞归巢等发挥作用。 IFITM家族包括IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5、IFITM6、IFITM7和IFITM10,除了IFITM5特异性表达与骨细胞,不依赖与IFN的表达,其余家族在IFN的调控下在多组织和器官广泛表达。其中,FITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM10在人类中表达,FITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5和IFITM6在小鼠中表达(图1)。
实验动物背景信息

实验所用小鼠(C57BL/6)背景。C57BL/6小鼠也被称为C57 black 6,也称作B6。1921年被培育出来,属于近交品系。该品系的最主要的两个特点就是品系稳定和易于繁殖。主要用途包括:作为生理学与病理学的实验动物模型、构建转基因动物模型、作为产生自发突变和诱发突变的同基因型小鼠的背景品系。该品系在国内使用频率高,价格相对便宜。

模型制作方法

3.1 实验材料

3.1.1 实验动物

C57BL/6购自北京维通利华实验动物技术有限公司  SCXK(京)2016-0006。超排用雌鼠数量10-15只,年龄3周龄,交配传代用野生型鼠为成年8-10周龄小鼠。实验中基因工程小鼠由本实验室繁殖产生。实验中涉及动物的操作程序已获得中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准,批准号为ZLF18004. 

 

3.1.2实验仪器

仪器及耗材

生产厂商

NanoZoomer S60数字病理切片扫描仪

日本滨松光子学株式会社

激光共聚焦扫描显微镜

Leica

流式细胞仪

BD

透射电子显微镜

JEOL

显微注射仪

Nikon

光学显微镜

Nikon

化学发光凝胶成像系统

BIO-RAD

PCR仪

BIO-RAD

Realtime PCR仪

ABI

冰冻切片机

Leica

电泳仪

BIO-RAD

电泳槽

Tanon

数码凝胶图像处理系统

Tanon

组织匀浆机

POLYTRON

恒温培养箱

温控振荡箱

Incucell

TAITEC

离心机

Eppendorf

摇床

SCILOGEX

塑料薄膜封口机

德清拜杰有限公司

电动鼓风干燥箱

天津市泰斯特仪器有限公司

电子称量器(量程0.5g-620g)

奥豪斯仪器(常州)有限公司

电子称量器(量程0.1mg-220g)

Sartorius

4℃冰箱

海尔集团

-80℃冰箱

SANYO

-20℃冰箱

SANYO

涡旋振荡器

上海沪西分析仪器厂

移液器

Eppendorf

 

3.1.3实验试剂

试剂

生产厂商

体外转录用试剂盒

Ambion

Taq DNA聚合酶

TaKaRa 

T7 转录试剂盒

Invitrogen

T4 DNA裂连接

TaKaRa 

胶回收试剂盒

Qiagen 

质粒提取试剂盒

Axygen 

Trizol试剂

Invitrogen 

逆转录试剂盒

DNA提取试剂盒

Invitrogen 

北京全式金生物科技有限公司

GADPH

Santa Cruz Biotechnology

NC膜

Millipore

化学发光液

Immuno Cruz

蛋白质分子量标记物

Takara

蛋白酶抑制剂

罗氏

组织裂解液

Thermo

丽春红

Beyotime

BCA试剂盒

Beyotime

Western blot 洗液(10×)

Beyotime

30%Acr-Bis

Beyotime

SDS-PAGE电泳液

Beyotime

Western blot转膜液(粉剂)

Beyotime

TEMED

Beyotime

过硫酸铵

Beyotime

1.5 M Tris·HCl(pH=8.8)缓冲液

Beyotime

1 M Tris·HCl(pH=6.8)缓冲液

Beyotime

琼脂

BD公司

异丙醇

北京化工厂

脱脂奶粉

内蒙古伊利实业集团股份有限公司

Anti-Flag

sc-166384

 

3.1.4模型构建流程

利用CRISPR/Cas9技术制备IFITM6敲除小鼠。选择敲除第二外显子,来构建IFITM6敲除小鼠 (B6. IFITM6 (tm)-GC/ILAS)。该基因敲除的杂合子小鼠,相互杂交可以获得该基因敲除的纯合子小鼠,使用PCR方法进行基因型鉴定。

3.1.5 IFITM6敲除小鼠的建立

3.1.5.1 IFITM6敲除小鼠模型的建立

(1)设计方案

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