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3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司【SCXK（京）2012-001】。实验中涉及动物的操作程序已获得中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准，批准号为ZLF18003.
3.1.2实验仪器
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仪器及耗材 |
生产厂商 |
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NanoZoomer S60数字病理切片扫描仪 |
日本滨松光子学株式会社 |
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Vevo770小动物超声影像系统 |
VisualSonics |
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激光共聚焦扫描显微镜 |
Leica |
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透射电子显微镜 |
JEOL |
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显微注射仪 |
Nikon |
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光学显微镜 |
Nikon |
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化学发光凝胶成像系统 |
BIO-RAD |
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PCR仪 |
BIO-RAD |
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组织脱水机 |
Leica |
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石蜡切片机 |
Leica |
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石蜡包埋机 |
Leica |
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冰冻切片机 |
Leica |
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电泳仪 |
BIO-RAD |
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电泳槽 |
Tanon |
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数码凝胶图像处理系统 |
Tanon |
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组织匀浆机 |
POLYTRON |
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恒温培养箱
温控振荡箱 |
Incucell
TAITEC |
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离心机 |
Eppendorf |
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摇床 |
SCILOGEX |
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塑料薄膜封口机 |
德清拜杰有限公司 |
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电动鼓风干燥箱 |
天津市泰斯特仪器有限公司 |
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电子称量器（量程0.5g-620g） |
奥豪斯仪器（常州）有限公司 |
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电子称量器（量程0.1mg-220g） |
Sartorius |
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4℃冰箱 |
海尔集团 |
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-80℃冰箱 |
SANYO |
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-20℃冰箱 |
SANYO |
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涡旋振荡器 |
上海沪西分析仪器厂 |
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移液器 |
Eppendorf |
3.1.3实验试剂
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试剂 |
生产厂商 |
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体外转录用试剂盒 |
Ambion |
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Taq DNA聚合酶 |
TaKaRa |
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T7 转录试剂盒 |
Invitrogen |
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T4 DNA裂连接 |
TaKaRa |
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胶回收试剂盒 |
Qiagen |
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质粒提取试剂盒 |
Axygen |
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Trizol试剂 |
Invitrogen |
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逆转录试剂盒
DNA提取试剂盒 |
Invitrogen
北京全式金生物科技有限公司 |
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DNMT1（MA5-16169）抗体 |
Invitrogen |
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GADPH |
Santa Cruz Biotechnology |
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NC膜 |
Millipore |
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化学发光液 |
Immuno Cruz |
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蛋白质分子量标记物 |
Takara |
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蛋白酶抑制剂 |
罗氏 |
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组织裂解液 |
Thermo |
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丽春红 |
Beyotime |
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BCA试剂盒 |
Beyotime |
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Western blot 洗液（10×） |
Beyotime |
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30%Acr-Bis |
Beyotime |
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SDS-PAGE电泳液 |
Beyotime |
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Western blot转膜液（粉剂） |
Beyotime |
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TEMED |
Beyotime |
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过硫酸铵 |
Beyotime |
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1.5 M Tris·HCl（pH=8.8）缓冲液 |
Beyotime |
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1 M Tris·HCl（pH=6.8）缓冲液 |
Beyotime |
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琼脂 |
BD公司 |
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异丙醇 |
北京化工厂 |
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脱脂奶粉 |
内蒙古伊利实业集团股份有限公司 |
3.1.4模型构建流程
利用Cre/loxP重组系统的原理，进行条件性敲除（Conditional knockout，CKO），制备心肌组织特异性DNMT1敲除大鼠。在DNMT1基因第1外显子两端插入两个loxP位点来构建DNMT1flox/+大鼠，使其与αMHC-Cre大鼠进行杂交，经两轮杂交最终获得DNMT1flox/flox/MHC-Cre大鼠，并使用PCR方法进行基因型鉴定，使用Western blot技术进行敲除效率的鉴定。
3.1.5 DNMT1条件性敲除大鼠及心肌组织特异性Isca1敲除大鼠的建立
3.1.5.1 DNMT1条件性敲除大鼠模型的建立
（1）设计方案 |
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