C57BL/6小鼠

1、模型设计原理：

GRNA介导Cas9蛋白剪切目标外显子两端的内含子DNA，同时提供同源模板Donor，基因组两端通过同源重组修复方式进行DNA修复，在特定外显子两端插入FloxP。 NHE1-FloxP小鼠与组织特异性表达Cre小鼠交配，从而实现NHE1基因条件性敲除的目的。实验采用最新的spCas91.1进行注射，减少了基因组中的off-Target。

2、动物模型制备

2.1 NHE1^floxp/flox小鼠鉴定PCR结果分析

2.2 NHE1^flox/flox, Plt Cre小鼠测序结果分析

经鉴定1#和4#为NHE1^flox/flox, Plt Cre 条件性敲除小鼠。

3. 标本采集及处理  

条件性敲除小鼠2月龄后，称体重，麻醉后腹主动脉采血至死亡，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清，-80℃冰箱冻存。取心脏、主动脉做石蜡切片，10%中性福尔马林中固定，30%蔗糖脱水，冰冻切片包埋剂包埋并切片；进行免疫组化及免疫荧光检测，其余血管组织液氮冷冻-80℃保存，提取蛋白进行免疫印迹检测。