APPPS1转基因阿尔兹海默病小鼠模型

APP基因位于染色体21q11.2-22.2上，由18个外显子和17个内含子组成。基因产物为跨膜糖蛋白，由APP基因通过选择性剪切翻译而成。APP至少有六种剪接形式，长度分别为365、563、695、714、751、770个氨基酸残基，其中695、751和770为主要形式。APP695主要在大脑表达，尤其在AD病人的海马回和皮层中APP695与APP751的比率异常，且与脑中这些部位斑块的数量呈正相关。由APP编码的APP蛋白经过加工水解可产生β淀粉样蛋白（β amyloid， Aβ）。病理情况下，APP经过β分泌酶和γ分泌酶分解生成Aβ40和Aβ42，其中Aβ42与AD患者脑中Aβ沉积和神经元的变性密切相关。在家族性AD患者中已鉴定出多个APP基因的突变位点。其中大部分突变位于外显子16和17的分泌酶裂解位点或APP跨膜区，如APP瑞典突变（APPswe：APP K670N和M671L）和伦敦突变（APPlon：APPV717I）。APP突变可改变APP的加工过程，导致具有神经毒性作用的Aβ42产生，引发多种病理机制，促使神经细胞凋亡或死亡，最终导致AD的发生。

PS1基因位于14号染色体，共10个外显子。PS1基因编码的PS蛋白为γ分泌酶的重要组成部分，在生成Aβ的过程中起重要作用。PS1突变是引起家族性AD的主要原因之一。PS1突变使其编码的蛋白亲水性环状结构域缺失，导致其构象改变，可影响γ-分泌酶的活性，使Aβ42生成增多。

1、模型制作

APP/PS1双转基因小鼠模型是利用PrP-hAPPK595N/M596L单转基因痴呆模型小鼠和PrP-hPS1dE9单转基因痴呆症模型小鼠杂交培育而成。

2、基因型鉴定

提取首建鼠后代鼠尾DNA，PCR扩增，1%琼脂糖凝胶电泳，结果如图1。

图1. PCR鉴定APP/PS1转基因小鼠的凝胶电泳分析结果。

M：marker；N：阴性对照；P：阳性对照；1,2,3,4,5号为APP/PS1转基因阳性小鼠