TBX6相关先天性脊柱侧凸小鼠模型_【CMA/CNAS认证】

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TBX6相关先天性脊柱侧凸小鼠模型

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疾病概述

先天性脊柱侧凸即通过X线，MRI或手术证实的特定的先天性椎体异常而引起的脊柱侧凸。这种畸形出生后即发病，因而患者出现畸形较特发性脊柱侧凸早。早期发病使先天性脊柱侧凸患者很少能接受到早期最佳的治疗。

实验动物背景信息

FVB/NJ品系基因敲除小鼠。

模型制作方法

我们采用CRISPR-Cas9技术编辑小鼠基因组。表 1中显示了小鼠基因组中指导RNA的靶标。我们混合了向导RNA和Cas9 mRNA（每个RNA 10 ng /μl），注射到FVB / NJ品系小鼠的合子（每次注射编辑200个细胞）。取得F0小鼠后，与野生型FVB / NJ小鼠杂交以获得后代。我们使用来自脚趾的基因组DNA，通过PCR和Sanger测序对小鼠进行基因分型。用于扩增和测序的PCR引物在表 2中显示。

表 1. 小鼠基因组中单向导RNA（sgRNA）的靶序列。

Location of target region	Sequences (5’-3’)
Exon 2 of Tbx6	GAGGCCCTTCACTCGCTTCC
Conserved regulatory region in the Tbx6 promoter	CCTAGGGATCAATCAGACCGAGG

Note: Sequences of sgRNA targets are underlined and the protospacer adjacent motif (PAM)sequences are shown in red.

表 2. 小鼠Tbx6基因分型的引物。

Primer	Sequence
Tbx6mh-F	5'-CAAGCGTCAGAGAAGACCACCA-3'
Tbx6mh-R	5'-CCTTACCCAGAGCCAATCCAAC-3'
Tbx6-exon 2-F	5'-ATCCTCATTCTTCCCACATCTC-3'
Tbx6-exon 2-R	5'-ATGCCCACCTCTTACAGTTTCT-3