心脏组织特异性过表达cTnIR145G转基因肥厚型心肌病小鼠模型

心脏组织特异性过表达cTnI^R145G转基因肥厚型心肌病小鼠模型

扩增并经测序比对正确的cTnI^R145G突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnI^R145G表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析cTnI^R145G突变蛋白的表达情况（图1）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准（GC05004）。

图1. cTnI^R145G转基因小鼠模型的建立及鉴定

将cTnI^R145G突变基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体(A). PCR法鉴定小鼠基因型(B), M: 分子量标记; 1: 阳性对照; 2: 阴性对照; 3: 空白对照;  5,8: cTnI^R145G阳性转基因小鼠; 4,6,7: 阴性转基因小鼠. Western Blot分析LMNA^E82K突变蛋白表达(C), WT: 同龄阴性对照小鼠; F₀28,24,4,45: 首建鼠28,24,4,45号; GAPDH: 内参.灰度扫描定量分析蛋白表达情况(D).