心脏组织特异性过表达cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

心脏组织特异性过表达cTnT^R141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

扩增并经测序比对正确的cTnT^R141W突变片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达cTnT^R141W表达载体（图1A）。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型（图1B），Northern Blot法分析cTnT^R141W的表达情况（图2）。实验中涉及动物的操作程序已经得到中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会的批准(GC-07-2001)

图1. cTnT^R141W转基因小鼠模型的建立及鉴定

(A) 将cTnT^R141W突变基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体. (B) PCR法鉴定小鼠基因型. 1: 阳性对照；2: 分子量标记；20:阴性对照；21:空白对照；3,15,18: cTnT^R141W阳性转基因小鼠；其余为阴性转基因小鼠.

图2. Northern Blot法分析cTnT^R141W转基因小鼠心肌组织cTnT的表达

(A) Northern Blot法观察内源及转基因外源cTnT基因RNA的表达情况. (B) PCR法分析未经及经酶消化后cTnT的表达，1,2:野生小鼠基因组对照；3,4:首建鼠1号；5,6:首建鼠13号；7,8:首建鼠16号.