人大细胞肺癌H460绿色荧光标记肿瘤模型
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发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:20
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资源中文名称 | 人大细胞肺癌H460绿色荧光标记肿瘤模型 |
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资源英文名称 | H460-eGFP |
疾病概述 | 大细胞肺癌起源于支气管粘膜上皮,局限于基底膜内者称为原位癌。癌肿可向支气管腔内或和临近的肺组织生长,并可通过淋巴、血行或经支气管转移扩散。其生长速度和转移扩散的情况与具体的组织学类型、分化程度等生物学特性有一定关系。大细胞肺癌常发生于肺上叶,多为周围型,体积较大,边界清楚,分叶,少见空洞。根据其病理类型可分为4类:(1)大细胞神经内分泌癌 这是一类显示神经内分泌分化的大细胞癌。细胞较大,呈多角形,胞质嗜酸,核多形,核仁较明显,核分裂像多见,常见大面积坏死。免疫组化染色,神经内分泌标记阳性,电镜下可见神经内分泌颗粒;(2)基底细胞样癌 细胞较大,立方形或梭形,分叶状或实性巢状排列,周边部癌细胞呈栅栏状排列;(3)淋巴上皮瘤样癌 罕见。组织形态与鼻咽部淋巴上皮瘤样癌相同。癌细胞打,泡状核,核仁明显,细胞成片或呈巢状,癌巢内及间质中有淋巴细胞侵润;(4)透明细胞癌罕见。瘤细胞打,多角形,胞质透明或泡沫状,无粘液,伴或不伴糖原。伴横纹肌样表型的大细胞癌罕见。细胞核大,多形性,胞质丰富,有嗜酸性小球,免疫组织化学既表达上皮性抗原,也显示横纹肌表型。 |
实验动物背景信息 | H460细胞系于1982年由A.F. Gazdar自一个男性大细胞肺癌患者的胸腔积液中培养获得。与普通肺癌细胞相比,该细胞具有较高水平的p53 mRNA的表达并且无总DNA结构异常。免疫酶标染色显示,该细胞具有角蛋白和波形蛋白阳性反应,但神经丝三联体蛋白反应阴性。该细胞是人亚三倍体细胞系,典型的染色体数是57,或者58条染色体数细胞也存在一定的比例,X和Y染色体在所有细胞中都存在2个拷贝数。 无胸腺裸鼠(Nude Mouse,简称裸鼠)目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。经过世界各国实验动物遗传育种学家的努力,目前已将nu基因导入不同近交系动物,成为系列动物模型,仅小鼠模型一种,已建立了二十余种近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植。因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。根据T.Fogh等1979~1980年的报导,已有150株人的瘤细胞和人体原发癌移植于裸鼠获得成功,目前已成功地结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比(35.7%)的良好生长,并可传代。若用已建株的人体肿瘤组织培养细胞作移植材料,接种后的成活率更高(41%)。 本实验中所用鼠种BALB/C-nu/nu,系1973年从丹麦引入日本中央实验动物所研究。继续培育三年后,交由日本CLEA株式会社进行生产。1980年由CLEA引入。雄鼠是无胸腺裸鼠(BALB/C-nu/nu),雌鼠是有胸腺的杂合小鼠(BALB/C-nu/+)。采用BALB/C-nu/+♀与BALB/C-nu/nu♂随机交配法进行繁殖,已取得较好成果,裸鼠的生产性能良好:受胎率达81.5%,平均产仔率8.1只/窝,平均产裸仔率3.99只/窝,窝平均仔鼠成活3.62只,9周龄仔鼠成活率100%,其主要项目数据与日本中央实验动物研究所(CLEA)和英国实验动物中心(LAC)发表的材料基本一致 |
模型制作方法 | 模型制作采用BALB/CA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15—18 g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:H460细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染H460细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2绿色荧光标记的H460-eGFP细胞系(200×) 稳定高表达GFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。
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动物模型的评价与验证 | |
保存方式 | 冷冻 |
更多相关 | 动物模型制备 |
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