SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型
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发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:21
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资源中文名称 | SHIVSF162P3阴道途径感染恒河猴模型 |
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资源英文名称 | Rhesus Macaques intravaginally infected with SHIVSF162P3 |
疾病概述 | 艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。 |
实验动物背景信息 | 恒河猴又名孟加拉猴、狝猴或广西猴。学名为(Macaca mulatta),英文名rhesus macaque。分类所属为哺乳纲(Mammalia),灵长目(Primates),人猴猿亚目(Anthopoidea),猴科(Cercopithecidae),狝猴属(Macaca)。月经周期为28(1-4)天,发情期为11-12个月,怀孕期163天,产仔期3-6个月,胎产仔1-2只,出生重250-380g,哺乳期3-7个月。 狝猴属中,恒河猴使用最广。因分子生物学进展,栗色狝猴用于生理、生化、遗传、血型及免疫等方面的研究更多,病理研究也不少,常用于医疗和药物实验等。 在生物学研究方面可用于生理学、心理学、遗传学的各种研究。 在生理学研究方面可用于脑功能、血液循环、呼吸生理、生殖生理、内分泌和老年学等各项实验。 在医学研究方面可用于感染人类所特有的传染病,特别是其他动物不能复制的传染病 药物学研究方面,预防小儿麻痹的糖丸,恒河猴是唯一的试验对象 ,人类避孕药物的研究,用恒河猴作试验是极为理想的,此外,恒河猴还常用于放射病出血和骨髓移植的实验。 (一)传染病学研究 (二)药理学和毒理学研究 (三)生殖生理研究 (四)口腔医学研究 (五)行为学和高级神经活动研究 (六)营养、代谢研究 (七)老年病研究 (八)器官移植和眼科研究 (九)内分泌病和畸胎学研究 (十)肿瘤学和环保研究 20世纪60年代出版的《狝猴文献录》中,涉及论文的多达五百余篇;在12种狝猴中,使用栗色狝猴的几乎占一半;试加分析,解剖文章占半数,生理学和生态学其次,再次是分类、地理分布、胚胎、进化、遗传和生化病理各有二十余篇,最少的是古生物和畜养、管理的文章。 |
模型制作方法 |
1、 实验用病毒:感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位,后肢抬高,暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、 SHIVSF162p3阴道感染猴样品采集和指标测定:感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3,间隔4-7d,进行阴道感染。在每次感染前及13次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL,分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、 SHIVSF162p3阴道感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SHIVSF162p3阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。 |
模型表型数据 |
1、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血病毒载量结果 6只实验猴都先后出现了血浆病毒载量(图1)。1-1感染后27d出现载量,37d达到高峰(6.498×107copies/mL),57d载量检测阴性消失,但在85d载量再次出现,直至246d载量一直都维持在105copies/mL左右。1-2病毒载量出现最早,初次感染后的23d达到5.665×105copies/mL,27d达到高峰(2.1×107copies/mL),随后下降,至57d检测呈阴性,共持续了4周时间,并且一直到第246d都持续阴性。1-3和1-4的载量变化与2号相似,只是载量出现时间稍晚,1-3的载量出现在37d,高峰期在45d,也达到了107copies/mL的水平,但只维持了2周的时间;1-4比1-2晚4d出现载量,出现时载量也已达到105copies/mL的水平,高峰期出现在31d(4.72×106copies/mL),维持了3周左右的载量。不同的是,它们分别在感染后154d和203d出现一过性小幅反弹,载量水平只在103-104copies/mL之间。1-5和1-6的载量出现最晚,均出现在感染后50d,并且不连续,没有明显的高峰,始终维持在104-106copies/mL的水平。 图1 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 6只实验猴的CD4+/CD8+比值在某一段时间内均有一个急剧下降的过程,总体有一个下降的趋势。1-1在感染后37d CD4+/CD8+比值迅速从感染后31d的1.51下降到0.50,并且持续走低,到300d时,已降低到0.35。1-2和1-4总体没有太大的变化,但分别在感染后31d和37d有一个下降过程。1-2由27d的3.89直降到1.55,其后又迅速回升,始终徘徊在3.0附近;1-4由2.72直降到1.69,并维持在这个水平上,只在182d有一个小幅波动。1-3和1-5变化基本相同,分别在感染后45d和64d降到最低,并且出现倒置,其中1-5甚至降到0.5以下,其后反弹并一直维持在0.8-1.0之间。1-6与1-3、1-5趋势相同,变化幅度小,没有出现倒置,始终维持在1.0以上,最低值1.02出现在85d(图2)。 图2 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果 所有实验猴的CD4+细胞绝对数在感染50天内都基本保持稳定,在1000个/µL全血上下浮动,随后均有逐步下降,但下降幅度不大,最低值始终在600以上(具体数据未显示)。只有1-1下降幅度较大,到感染后274d时,已降到293个细胞/µL猴血(图3)。 图3 SHIVSF162p3阴道途径感染恒河猴1-1 外周血CD4+T细胞绝对数的变化 Fig.3 The CD4+ T cell counts in Chinese-original rhesus macaques 1-1 infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 |
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