蓝舌病琼脂免疫扩散试验检测概述

蓝舌病（Bluetongue Disease，BT）是由蓝舌病病毒（BTV）引起的一种非接触性虫媒传染病，主要感染反刍动物，尤其是绵羊。该病被世界动物卫生组织（OIE）列为必须通报的疫病，对畜牧业造成重大经济损失。琼脂免疫扩散试验（Agar Gel Immunodiffusion Test，AGID）是检测蓝舌病病毒抗体或抗原的经典方法之一，具有操作简单、成本低廉、特异性较高等特点，广泛应用于基层实验室和流行病学调查中。通过该试验，可快速确定动物群体的感染状态，为防控策略制定提供科学依据。

检测项目

蓝舌病琼脂免疫扩散试验主要检测项目包括：
1. BTV抗体检测：通过检测血清中的特异性抗体，评估动物是否感染或曾暴露于蓝舌病病毒。
2. BTV抗原检测：利用已知标准抗体验证样本中是否存在病毒抗原，适用于病原鉴定。

检测仪器与试剂

试验所需的核心仪器及试剂包括：
1. 水平电泳仪：用于琼脂板的均匀铺制和电泳条件控制。
2. 恒温培养箱：维持37℃恒温环境以促进抗原抗体反应。
3. 高速离心机：用于血清样本的前处理。
4. 专用打孔器：在琼脂板上制备标准孔阵。
5. 标准BTV抗原/抗体：由OIE认证的参考实验室提供。
6. 琼脂糖与缓冲液：配制1%-1.5%琼脂凝胶，pH值调至7.2-7.4。

检测方法与步骤

试验操作流程分为以下关键步骤：
1. 样本制备：采集动物血清，56℃灭活30分钟后离心取上清液。
2. 琼脂板制备：将琼脂糖溶解于Tris-EDTA缓冲液，均匀倒入平皿形成3mm厚凝胶层。
3. 孔阵布局：采用中心-周围六孔模式，中心孔加注标准抗原，周围孔依次加入待测血清和阴阳性对照。
4. 免疫扩散反应：将琼脂板置于湿盒中37℃孵育24-48小时，观察沉淀线形成。
5. 结果判读：待测血清孔与中心孔间出现清晰沉淀线为阳性，无沉淀线或仅对照孔出现为阴性。

检测标准与质量控制

试验需遵循以下国际及国家标准：
1. OIE标准：参考《陆生动物诊断试验与疫苗手册》中的AGID操作规程。
2. GB/T 22915-2008：中国蓝舌病琼脂免疫扩散试验技术规范。
3. 质量控制要求：每批次试验必须设置阳性对照（已知BTV阳性血清）和阴性对照（健康动物血清），且阳性对照需呈现典型沉淀线，阴性对照无反应方视为有效试验。

结论

琼脂免疫扩散试验作为蓝舌病诊断的常规方法，在疫病监测和防控中发挥着重要作用。尽管其敏感性低于ELISA或PCR方法，但在资源有限的地区仍具有显著应用价值。严格遵循标准化操作流程、规范试剂储存条件以及定期进行实验室能力验证，是确保检测结果准确可靠的关键措施。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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