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鸡病毒性关节炎琼脂凝胶免疫扩散试验检测

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发布时间：2025-05-14 05:55:02 更新时间：2025-05-13 05:55:04

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

鸡病毒性关节炎琼脂凝胶免疫扩散试验检测概述

鸡病毒性关节炎（Viral Arthritis, VA）是由禽呼肠孤病毒（Avian Reovirus, ARV）引起的一种高度接触性传染病，主要侵害鸡的关节滑膜、腱鞘和心肌，导致关节肿胀、跛行及生长迟缓。该病在全球范围内对养禽业造成显著经济损失，尤其是肉鸡和种鸡群。琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）作为一种经典的血清学检测方法，因其操作简便、成本低廉且特异性较高等特点，被广泛应用于病毒性关节炎抗体的检测与流行病学调查。

检测项目

本试验主要针对鸡血清或卵黄中禽呼肠孤病毒特异性抗体的检测，用于评估鸡群免疫状态、疫苗效果监测或感染早期诊断。检测对象包括感染鸡的关节液、组织匀浆液或病毒培养物中的抗原成分。通过AGID试验，可区分自然感染与疫苗免疫产生的抗体，为疫病防控提供依据。

检测仪器与试剂

试验所需核心仪器包括：1. 琼脂糖电泳仪（用于制备琼脂板）；2. 恒温培养箱（37℃孵育条件控制）；3. 微量移液器（精确加样）；4. 暗视野观察灯（增强沉淀线显影效果）。试剂主要包括：琼脂糖、标准阳性血清/抗原、阴性对照血清、pH 7.2磷酸盐缓冲液（PBS）以及染色剂（如考马斯亮蓝）等。

检测方法与步骤

1. 琼脂板制备：将1%琼脂糖溶于PBS中，加热溶解后倾注于平皿中形成厚度约3mm的凝胶层，冷却凝固后打孔（中心孔为抗原，周边孔为待测血清）。 2. 样本处理：采集鸡血清或卵黄样本离心去除杂质，56℃灭活30分钟。 3. 加样与扩散：中心孔加入已知抗原，周边孔依次加入阳性对照、阴性对照及待检样本，置于湿盒中37℃孵育18-24小时。 4. 结果判读：观察抗原与抗体间是否形成白色沉淀线，阳性样本在抗原孔与血清孔间呈现清晰直线，阴性则无此现象。

检测标准与结果解释

试验需严格遵循《动物疫病诊断技术规范》（GB/T 18635-2020）及《禽呼肠孤病毒检测规程》（NY/T 563-2016）。判定标准为： - 阳性：至少一条明显沉淀线且与阳性对照一致； - 阴性：无沉淀线或与阴性对照一致； - 可疑：沉淀线模糊需重复试验或结合PCR进一步确认。检测报告应注明样本来源、检测条件及结果判定依据，必要时提供抗体效价分析。

该方法的灵敏度为80%-90%，特异性可达95%以上，但需注意避免样本溶血、琼脂板干燥或孵育温度异常导致的假阴性。对于规模化养殖场，建议结合分子生物学方法（如RT-PCR）进行综合诊断。