大肠埃希氏菌(大肠杆菌)检测
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发布时间:2025-05-17 10:07:13 更新时间:2025-05-16 10:07:14
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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大肠埃希氏菌(Escherichia coli,简称大肠杆菌)是人体和温血动物肠道中常见的革兰氏阴性杆菌,大多数菌株对人体无害,但部分致病性菌株(如O157:H7、O104:H4等)可引发严重食源性疾病、泌尿系统感染甚至败血症。随着食品安全、医疗诊断和环境监测需求的提升,大肠杆菌检测已成为实验室常规检测项目。通过科学规范的检测流程,可有效评估食品卫生安全、水质污染程度及临床感染诊断,对公共卫生和疾病防控具有重要意义。
大肠杆菌检测通常分为以下三类:
1. 定性检测:确定样品中是否存在大肠杆菌或其特定致病株;
2. 定量检测:测定样品中大肠杆菌的浓度(如CFU/g或CFU/mL);
3. 分型检测:通过血清学或分子生物学方法鉴定菌株的血清型、毒力基因或耐药性。
现代实验室中,大肠杆菌检测主要依赖以下设备:
- PCR仪:用于扩增特异性基因片段(如uidA、stx1/stx2等);
- 酶标仪(ELISA检测系统):检测抗原抗体反应;
- 荧光显微镜:观察免疫荧光标记结果;
- 全自动微生物鉴定系统(如VITEK、MALDI-TOF质谱仪);
- 滤膜培养装置:用于水质检测中的膜过滤法。
1. 传统培养法
基于ISO标准的多管发酵法和滤膜法:通过选择性培养基(如EMB、MacConkey琼脂)分离菌落,结合IMViC生化试验(吲哚、甲基红、VP、柠檬酸盐)进行鉴定。优点为成本低,但耗时较长(需48-72小时)。
2. 分子生物学检测
- PCR法:针对特异性基因(如lacZ、uidA)进行扩增;
- Real-time PCR:可定量检测并区分致病株;
- 基因芯片技术:同时检测多种毒力因子(如肠毒素基因)。
3. 免疫学方法
- ELISA试剂盒:检测菌体抗原或毒素;
- 免疫磁珠分离技术(IMS):提高目标菌富集效率。
4. 快速检测技术
- 显色培养基法:通过酶底物显色缩短检测周期至18-24小时;
- 生物传感器:利用纳米材料实现实时监测。
国际标准
- ISO 16654:2001(食品中O157:H7检测)
- FDA BAM Chapter 4(美国食品药品监督管理局方法)
- EPA Method 1603(美国环保署水质检测)
中国标准
- GB 4789.38-2012 食品安全国家标准 大肠埃希氏菌计数
- GB/T 5750.12-2023 生活饮用水标准检验方法
- SN/T 1827-2019 进出口食品中致泻性大肠杆菌检测
当前检测技术正向快速化、自动化和精准化发展:
1. 多重PCR结合微流控芯片技术可实现多病原同步检测;
2. 全基因组测序(WGS)用于暴发溯源和耐药性分析;
3. 基于CRISPR的核酸检测技术提升特异性。
实验室应根据样品类型(食品、水样、临床标本)和检测目的,合理选择方法组合,并严格按照标准操作程序(SOP)实施质量控制,确保检测结果的准确性和可比性。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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