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核酸定量PCR检测

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发布时间：2025-05-18 05:45:51 更新时间：2025-05-17 05:45:52

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

核酸定量PCR检测概述

核酸定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction，qPCR）是一种基于聚合酶链式反应（PCR）的高灵敏度分子生物学技术，能够对DNA或RNA模板进行精确定量分析。该技术广泛应用于医学诊断、病原体检测、基因表达分析、转基因检测及科学研究等领域。与传统PCR不同，qPCR通过实时监测荧光信号的变化，结合标准曲线或阈值循环数（Ct值），实现对目标核酸的绝对或相对定量。其核心优势在于高特异性、高灵敏度和可重复性，已成为分子诊断和基础研究的关键工具。

检测项目

核酸定量PCR检测的主要项目包括：
1. 病原体检测：如病毒（HIV、HBV、HPV等）、细菌、真菌的核酸载量分析；
2. 基因表达分析：mRNA水平的定量研究，用于癌症标志物检测或药物研发；
3. 基因分型与突变检测：单核苷酸多态性（SNP）或特定基因突变的定量鉴定；
4. 转基因成分检测：食品或环境中转基因生物的定量筛查；
5. 拷贝数变异分析：基因组中特定区域的拷贝数变化检测。

检测仪器

核酸定量PCR检测需使用专用设备：
1. 实时荧光定量PCR仪：如ABI QuantStudio系列、Bio-Rad CFX系列，具备多通道荧光检测功能；
2. 核酸定量仪：如NanoDrop分光光度计或Qubit荧光计，用于样本初始浓度测定；
3. 样本制备系统：自动化核酸提取仪（如QIAGEN QIAcube）；
4. 数据分析软件：仪器配套软件（如Applied Biosystems SDS）或第三方分析工具。

检测方法

核酸定量PCR主流检测方法包括：
1. SYBR Green法：通过结合双链DNA的荧光染料实现检测，成本低但需优化引物特异性；
2. TaqMan探针法：使用荧光标记的水解探针，特异性高且适用于多重检测；
3. 数字PCR（dPCR）：将反应体系分割为微滴，通过终点法实现绝对定量；
4. 逆转录定量PCR（RT-qPCR）：用于RNA病毒的检测或基因表达分析。

检测标准

核酸定量PCR检测需遵循国际与国内标准：
1. MIQE指南：国际公认的最小实验信息标准（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）；
2. ISO 20395:2019：生物技术核酸定量方法验证要求；
3. GB/T 37875-2019：中国核酸检测试剂盒质量评价通用技术要求；
4. CLSI指南：如EP25-A标准对定量检测的性能验证要求。
检测过程需严格控制样本处理、引物设计、扩增效率（90%-110%）、标准曲线（R²≥0.98）及内参基因选择等关键环节，确保数据可靠性。