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禾草腥黑粉病、剪股颖腥黑粉菌、黑麦草腥黑粉菌检测

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发布时间：2025-05-20 06:14:02 更新时间：2025-05-19 06:14:03

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

禾草腥黑粉病及其病原菌检测的重要性

禾草腥黑粉病是由剪股颖腥黑粉菌（Ustilago agrostidis）和黑麦草腥黑粉菌（Ustilago bromina）等病原真菌引起的严重植物病害，主要危害禾本科牧草、草坪草及谷物作物。该病通过孢子传播，导致植株畸形、产量下降甚至绝收，对农业生产和生态系统造成重大威胁。随着全球草种贸易的频繁，病原菌跨境传播风险加剧，因此建立科学的检测体系对病害防控、种质资源保护和国际贸易检疫具有重要意义。

检测项目与内容

针对禾草腥黑粉病的检测主要包含以下项目：
1. 病原菌种类鉴定：区分剪股颖腥黑粉菌、黑麦草腥黑粉菌及其他相近种；
2. 孢子形态学分析：观察孢子颜色、形状、表面纹饰等特征；
3. 分子生物学检测：通过基因序列分析确定特异性标记；
4. 寄主植物侵染试验：验证病原菌的致病性；
5. 种子带菌率检测：评估种子健康状态及检疫风险。

检测仪器与设备

检测过程中需使用多种精密仪器：
- 光学显微镜（配备显微成像系统）：用于孢子形态观察与测量；
- PCR扩增仪：进行病原菌DNA扩增；
- 凝胶电泳系统：分析PCR产物特异性；
- 实时荧光定量PCR仪（qPCR）：实现病原菌定量检测；
- 高通量测序平台：用于全基因组分析与种间区分；
- 超净工作台：保障无菌样本处理。

检测方法与技术流程

检测流程分为传统检测和分子检测两类：
1. 传统检测法：
- 样本预处理：采用0.5%次氯酸钠浸泡种子表面消毒；
- 孢子悬浮液离心富集，显微镜镜检（400×）；
- 染色法（如棉蓝染色）增强孢子结构辨识度。
2. 分子检测法：
- DNA提取：使用CTAB法或商业化试剂盒；
- ITS序列扩增：引物选用ITS1/ITS4；
- 特异性探针设计：针对U. agrostidis的β-tubulin基因设计引物；
- 多重PCR或荧光标记技术提高检测灵敏度。

检测标准与规范

国内外主要参考以下标准：
- 国际标准：
- ISPM 27（国际植物检疫措施标准）关于限制定性有害生物；
- ISTA（国际种子检验协会）种子健康检验规程。
- 中国标准：
- GB/T 3543.5-1995《农作物种子检验规程病害检验》；
- SN/T 1151.2-2011《植物病原真菌检测规范第2部分：黑粉菌》；
- NY/T 1213-2020《牧草种子产地检疫规程》。