皮肤致敏&变应性接触性皮炎：人细胞系活化试验（h-CLAT）检测概述

皮肤致敏反应是化学品、化妆品及医疗器械等产品安全评估中的关键指标，尤其是变应性接触性皮炎（ACD）的预测与预防至关重要。传统动物实验因伦理和法规限制逐渐被替代方法取代，而人细胞系活化试验（Human Cell Line Activation Test, h-CLAT）作为一种先进的体外检测技术，被广泛应用于评估物质的致敏潜力。h-CLAT通过模拟人体免疫反应，检测化学物质对特定人源细胞系的活化效应，从而预测其致敏性。该方法基于国际认可的标准，具有高效、重复性好且符合3R（替代、减少、优化）原则的特点，已成为欧盟ECVAM（欧洲替代方法验证中心）和OECD（经济合作与发展组织）推荐的标准化方法之一。

检测项目

h-CLAT的核心检测项目是评估受试物质是否诱导人单核细胞白血病细胞系（THP-1或U937）表面标志物CD86和CD54的表达水平显著升高。这两种蛋白的过度表达与抗原呈递细胞的活化密切相关，可作为致敏反应的生物标志物。实验通过定量分析这两种标志物的表达变化，结合细胞活力数据，综合判定物质的致敏潜力。

检测仪器

h-CLAT检测需依赖多种精密仪器，包括： 1. 流式细胞仪：用于快速检测细胞表面CD86和CD54的表达水平； 2. 细胞培养箱：提供恒温（37°C）、5% CO₂的细胞培养环境； 3. 酶标仪：用于测定细胞毒性相关的MTT或Alamar Blue试验； 4. 离心机与显微镜：辅助完成细胞分离与形态观察。 此外，自动化液体处理系统和数据分析软件可提升实验效率与准确性。

检测方法

h-CLAT的标准操作流程分为以下步骤： 1. 细胞培养与处理：将THP-1细胞与不同浓度受试物共孵育24小时； 2. 标志物检测：通过流式细胞术定量分析CD86和CD54的表达； 3. 细胞活力测定：使用MTT法评估受试物的细胞毒性； 4. 数据分析：计算相对荧光强度（RFI）并判断阈值（CD86≥150%，CD54≥200%）； 5. 结果判定：若两种标志物均达到阈值且细胞存活率≥50%，则判定为阳性致敏物。

检测标准

h-CLAT的实验设计与结果解读需严格遵循国际标准： 1. OECD TG 442E：详细规定h-CLAT的适用性、操作步骤及数据接受标准； 2. EU Regulation (EC) No 1223/2009：要求化妆品成分需通过h-CLAT等替代方法评估安全性； 3. ISO 10993-23:2021：医疗器械生物相容性评价中推荐使用h-CLAT作为皮肤致敏测试方法。 实验需通过阳性对照（如DNCB）和阴性对照（如乳酸）验证系统可靠性，确保结果的可重复性与准确性。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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