眼刺激替代试验-短期暴露法检测概述

眼刺激替代试验-短期暴露法（Short Time Exposure, STE）是一种基于体外细胞模型的非动物实验方法，主要用于评估化学品、化妆品原料或成品对眼睛的潜在刺激性。随着全球范围内动物实验禁令的推进（如欧盟化妆品法规EC 1223/2009），该方法因其高效性、可重复性和伦理优势，成为替代传统兔眼刺激试验的核心技术之一。STE法通过短期暴露（通常为5分钟）受试物于角膜上皮细胞系（如SIRC细胞），结合细胞毒性、炎症反应等指标，综合评判物质的眼刺激性等级。

检测项目

眼刺激替代试验-短期暴露法主要检测以下关键指标：
1. 细胞存活率：通过MTT法或CCK-8法测定细胞代谢活性，评估受试物的直接毒性；
2. 细胞形态学变化：显微镜下观察细胞皱缩、脱落等病理改变；
3. 炎症因子释放：检测IL-1α、IL-6等促炎因子水平；
4. 膜完整性检测：LDH漏出率反映细胞膜损伤程度。

检测仪器

实验需配备以下核心设备：
- 细胞培养系统（CO₂培养箱、生物安全柜）
- 酶标仪（用于吸光度测定）
- 倒置相差显微镜（细胞形态观察）
- 流式细胞仪（可选，用于凋亡分析）
- 微孔板分光光度计（ELISA检测炎症因子）

检测方法

STE法标准操作流程包括：
1. 细胞培养：SIRC细胞在96孔板中培养至80%融合度；
2. 受试物暴露：梯度稀释样品与细胞接触5±0.5分钟；
3. 细胞活性检测：清洗后继续培养24小时，测定细胞存活率；
4. 数据分级：根据OECD TG 492标准，按细胞存活率分为无刺激（＞70%）、轻度刺激（50-70%）、严重刺激（＜50%）。

检测标准

主要遵循以下国际规范：
- OECD TG 492：体外角膜刺激试验验证指南
- ISO 10993-10：医疗器械生物学评价中的刺激试验标准
- 欧盟ECVAM：替代方法验证科学咨询委员会技术规范
- 中国GB/T 16886.10：医疗器械生物学评价第10部分

结论

短期暴露法通过精准量化细胞毒性指标，可有效区分GHS分类中的1类（严重眼损伤）和2类（眼刺激）物质，其与体内试验的一致性可达85%以上。随着器官芯片、3D角膜模型等新技术整合，该方法的检测灵敏度和适用范围将持续提升，为化学品安全评估提供更可靠的体外解决方案。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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