密闭空间空气消毒效果的试验方法(现场试验(多个点))检测
密闭空间(如洁净室、生物安全实验室、医院手术室、无菌生产车间、隔离病房、冷藏车、方舱等)的空气消毒效果直接关系到环境安全、人员健康以及特定工艺的质量控制。现场多点试验是评价消毒剂或消毒设备在实际应用环境中对空气中微生物杀灭效果最为直接、客观和可靠的方法。相较于实验室模拟试验,现场试验能更真实地反映消毒剂或设备在复杂环境下的性能、均匀性及穿透能力,尤其是在存在干扰物、气流扰动和不同材质表面的情况下。本试验方法旨在通过科学、规范的流程,对密闭空间内多个代表性点位的空气进行消毒前后的微生物采样和定量分析,从而全面、准确地评估消毒措施的整体有效性。
检测项目
核心检测项目为密闭空间空气中自然菌或特定指示微生物的杀灭效果评估,重点关注:
- 消毒前空气本底菌浓度: 消毒开始前,在选定的多个采样点采集空气样本,测定空气中的自然菌落总数(CFU/m³)或特定目标指示微生物(如枯草杆菌黑色变种芽孢、白色葡萄球菌等)的浓度。
- 消毒后空气残留菌浓度: 消毒程序结束后,在相同采样点立即(或按预定时间)采集空气样本,测定残留微生物浓度。
- 杀灭率/消亡率/清除率: 计算各采样点及空间整体平均的微生物减少量,常用公式为:杀灭率 (%) = [(消毒前平均浓度 - 消毒后平均浓度) / 消毒前平均浓度] × 100%。空间整体平均杀灭率更能反映消毒的全面效果。
- 杀菌效果均匀性: 通过比较不同采样点消毒后的残留菌浓度或各点杀灭率,评估消毒效果在空间内的分布均匀性。
检测仪器
进行现场多点空气微生物采样,主要使用以下仪器:
- 撞击式空气微生物采样器: 最常用类型。
- 狭缝式采样器: 如JWL系列、Andersen采样器等。空气通过狭缝加速撞击到旋转的培养皿琼脂表面,按空气动力学直径分级捕获微生物粒子。
- 筛孔式采样器: 如LWC-1型离心式空气采样器、MAS-100等。空气通过精密孔板撞击到下方的琼脂平板上。
- 液体冲击式采样器: 如AGI-30、BioSampler等。空气高速冲击到采集液中,将微生物捕获到液体介质中,适用于后续的微生物浓缩、分子生物学检测或对脆弱的病毒采样。
- 过滤式采样器: 空气通过无菌滤膜(如聚碳酸酯膜、硝酸纤维素膜、凝胶过滤膜),微生物被截留在滤膜上,滤膜可转移至培养基培养或用洗脱液洗脱后检测。
- 培养设备: 恒温培养箱(用于细菌、真菌培养)、厌氧培养箱(如需)。
- 计数工具: 菌落计数器(手动或自动)。
- 辅助设备: 便携式风速仪(监测采样点气流,确保符合采样器要求)、温湿度计(记录环境参数)、计时器、无菌培养皿/采样瓶、消毒记录表。
检测方法
现场多点试验遵循严格流程:
- 试验前准备:
- 确定消毒方案(消毒剂、浓度、作用时间、作用方式-喷雾、熏蒸、气溶胶、紫外线/臭氧发生器等)。
- 勘察现场,了解空间结构、体积、通风系统、主要设备和人员活动情况。
- 布点设计(关键): 根据空间大小、形状、气流走向、潜在污染源位置、关键工作区域(如操作台、手术台)以及均匀性要求,科学设置多个(通常不少于5个点,大空间需更多)代表性采样点。点应覆盖中心、四角(距墙1m)、送风口下方、回风口附近、人员密集区、设备附近及消毒可能不易到达的死角。
- 校准采样器,准备足量的无菌培养基平板或采样液、滤膜。
- 设定对照组(如需)及试验重复次数。
- 本底采样(消毒前):
- 在预定采样点,按采样器操作规范(设定采样流量、采样时间,通常累计采样空气量需使平板上菌落数在30-300 CFU之间为宜)采集消毒前的空气样本。每个点应平行采样至少2-3次。
- 记录采样位置、流量、时间、环境温湿度、人员活动状态等。
- 消毒过程:
- 严格按照预定消毒方案执行消毒操作。记录消毒剂用量、作用浓度(如熏蒸)、作用时间、开始和结束时间、环境温湿度等关键参数。
- 消毒后采样:
- 消毒作用时间结束后,立即(或按规定的时间点,如15min、30min后)在完全相同的采样点,使用相同类型、流量和采样时间的采样器进行采样。这是评估即时效果的关键。
- 如需评估持续效果或残留,可在后续时间点(如1h, 2h, 4h后)进行补充采样。
- 样本处理与培养:
- 撞击式采样:将采集后的平板盖好,标记清楚,尽快置于恒温培养箱(细菌一般为35-37℃培养48h,真菌25-28℃培养72h-5d)中培养。
- 液体冲击式/过滤式采样:需尽快将采样液或洗脱液进行适当稀释(如需),取适量涂布或倾注到合适培养基平板培养,或将滤膜贴在培养基表面培养。
- 菌落计数与计算:
- 培养结束后,计数各平板的菌落数(CFU)。
- 根据采样流量和采样时间,计算各采样点每次采样的空气微生物浓度(CFU/m³)。
- 分别计算消毒前、后各采样点的平均浓度(CFU/m³)。
- 计算每个点的杀灭率。
- 计算所有点的消毒后平均浓度和空间整体平均杀灭率。
- 分析各点杀灭率的差异,评估消毒均匀性。
- 结果报告: 包含试验空间信息、消毒方法、采样布点图、采样仪器与方法、检测项目、原始数据、计算结果(各点及平均浓度、各点及平均杀灭率)、消毒效果评价、环境参数记录等。
检测标准
进行密闭空间空气消毒效果现场多点检测,需参考和遵循国内外相关标准、指南和技术规范,主要包括:
- 国内标准:
- GB/T 18883-2022《室内空气质量标准》:虽为综合标准,但其附录提供了室内空气菌落总数的检验方法(撞击法)。
- GB 15982-2012《医院消毒卫生标准》:规定了医院各类环境空气的菌落总数要求(如Ⅲ类环境 ≤4.0 CFU/皿·30min,对应约≤150 CFU/m³)和监测方法(沉降菌法为主,也可用浮游菌法即撞击法)。是医院消毒效果评价的核心依据。
- GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》及配套检测指南:详细规定了洁净室(区)空气洁净度(包括微生物浓度)的检测方法(主要用撞击法),对采样点布置有明确要求(如最少采样点数计算)。
- WS/T 368-2012《医院空气净化管理规范》:提供了医院空气净化方法的选择与效果评价指导。
- 消毒技术规范(卫生部):提供了空气消毒
CMA认证
检验检测机构资质认定证书
证书编号:241520345370
有效期至:2030年4月15日
CNAS认可
实验室认可证书
证书编号:CNAS L22006
有效期至:2030年12月1日
ISO认证
质量管理体系认证证书
证书编号:ISO9001-2024001
有效期至:2027年12月31日