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空气微生物污染检查方法检测

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发布时间：2025-06-03 14:41:39 更新时间：2025-06-02 14:41:39

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

空气微生物污染检查方法检测

空气微生物污染是指空气中存在的、可能对人员健康、生产工艺或产品质量产生不利影响的微生物（如细菌、真菌、病毒等）及其代谢产物。它们广泛存在于各类室内外环境中，尤其在医院、制药车间、食品工厂、实验室、公共场所及人员密集区域，其浓度水平是评价空气质量、环境卫生状况和生物安全风险的重要指标。因此，建立科学、规范的空气微生物污染检查方法并进行定期检测至关重要，是保障公共卫生安全、控制感染传播、维护特定环境洁净度和产品质量的关键环节。

检测项目

空气微生物污染的检测主要关注以下几类项目：

细菌总数：反映空气中总体活菌的污染程度，是评价空气质量的基本指标。
真菌总数：评估空气中霉菌、酵母菌等真菌的污染水平，对于过敏原控制、文物保护、电子洁净室等尤为重要。
特定病原微生物：根据环境和需求，可能针对性检测如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、军团菌、结核分枝杆菌、SARS-CoV-2病毒等特定致病微生物。
β-溶血性链球菌（医院环境）：常作为医院感染控制的监测指标之一。

检测仪器

进行空气微生物采样，核心是使用特定的采样器，将空气中的微生物有效收集到培养基或液体中。常用仪器包括：

撞击式采样器：
- 安德森（Andersen）多级撞击采样器：通过不同孔径的筛板进行分级撞击，可采集不同粒径范围的微生物粒子，并能反映粒子的空气动力学直径分布。
- 离心式采样器（如RCS）：利用离心力将空气中的微生物粒子甩到含有培养基的条带上。
- 筛孔撞击式采样器（如JWL型）：单级或双级，结构相对简单。
液体冲击式采样器：如AGI采样瓶（全玻璃液体撞击采样器），空气高速通过液体介质，微生物被捕获在液体中，适用于病毒或易受损微生物的收集。
滤膜采样器：使用微孔滤膜（如聚碳酸酯膜）抽滤空气，微生物被截留在膜上，然后可将膜转移到培养基上培养或进行分子生物学检测。
自然沉降法（沉降平板）：最简单的方法，将装有固体培养基的培养皿暴露在空气中特定时间（如5-30分钟），依靠重力使微生物粒子自然沉降到平板上。此法虽简便，但定量准确性相对较低，受气流影响大。

检测方法

空气微生物检测的核心流程包括：采样 > 培养/处理 > 计数/分析。主要方法如下：

1. 采样方法：根据选定的仪器（撞击式、液体冲击式、滤膜式或沉降法）进行现场空气采样。需记录采样点位置、高度、采样流量、采样时间、环境温湿度等关键参数。
2. 培养计数法（最常用）：
- 对于撞击式和沉降法采集的样品，直接将采集后的琼脂平板置于恒温培养箱中培养（细菌通常37℃培养24-48小时，真菌通常25-28℃培养3-5天）。
- 培养结束后，统计平板上生长的菌落形成单位（CFU）。
- 计算空气中微生物浓度：撞击式结果为CFU/m³（采样流量×时间）；沉降法结果为CFU/皿·暴露时间(min) 或换算成CFU/m³（需经验公式，准确性受限）。
3. 膜过滤培养法：将滤膜采样后的滤膜面朝上贴于相应的固体培养基表面进行培养，计数滤膜上的菌落数，再换算成CFU/m³。
4. 液体收集培养法：对于液体冲击式采样器收集的样品，可将液体样本直接或经过稀释/浓缩后：
- 倾注平板：吸取一定体积液体与熔化的琼脂混合，培养计数。
- 涂布平板：吸取一定体积液体涂布在固体培养基表面，培养计数。
- 也可进行MPN（最可能数）法或其它特定检测。
5. 快速检测法：
- ATP生物发光法：快速检测物体表面或液体样品中所有活微生物（含细菌、真菌）的总ATP量，间接反映生物负荷，结果快（几分钟）但无法区分种类且受非微生物ATP干扰。
- 分子生物学方法（PCR、qPCR、宏基因组测序等）：对采集的样本（空气、滤膜、液体）进行核酸提取，通过特定引物扩增目标微生物基因片段或进行高通量测序。此方法灵敏度高、特异性强、速度快，可检测难培养或不可培养微生物及特定病原体，但成本较高，且检测的是核酸（可能包括死菌），操作相对复杂。

检测标准

空气微生物检测需遵循相关的国家标准、行业标准或国际标准，以保证方法的规范性、结果的可比性和可靠性。常用的标准包括：

中国国家标准（GB/T）：
- GB/T 18204.3-2013 《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物》 - 详细规定了细菌总数、真菌总数的自然沉降法和撞击法。
- GB 15982-2012 《医院消毒卫生标准》 - 规定了医院不同环境空气细菌菌落总数的标准限值及检测方法（主要为沉降法）。
- GB/T 16293-2010 《医药工业洁净室（区）悬浮菌的测试方法》 - 规定了制药工业洁净环境悬浮菌（浮游菌）的测试方法（主要为撞击式采样器）。
- GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》 - 规定了制药工业洁净环境沉降菌的测试方法（自然沉降法）。
- GB 50686-2011 《电子工业洁净厂房设计规范》（附录中有微生物检测要求）
国际标准（ISO）：
- ISO 14698-1:2003 《洁净室及相关受控环境生物污染控制第1部分：一般原则和方法》
- ISO 14698-2:2003 《洁净室及相关受控环境生物污染控制第2部分：生物污染数据的评价和解释》
- ISO 16000-18:2011 《室内空气第18部分：利用撞击法检测和计数霉菌》
- ISO 16000-17:2008 《室内空气第17部分：霉菌检测-基于培养的取样》
美国药典（USP）： USP <797> Pharmaceutical Compounding—Sterile Preparations 和 USP <1116> Microbiological Control and Monitoring of Aseptic Processing Environments 中对无菌环境（包括空气）的微生物监测有详细规定和要求。
行业特定规范： 如GMP（药品生产质量管理规范）、HACCP（危害分析与关键控制点）体系中对相关生产环境的空气微生物监控都有具体要求。