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肺炎克雷伯杆菌检测

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发布时间：2025-06-07 04:03:16 更新时间：2025-06-06 04:03:16

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

肺炎克雷伯杆菌检测：临床诊断与防控的关键

肺炎克雷伯杆菌（Klebsiella pneumoniae）是一种重要的革兰氏阴性条件致病菌，广泛存在于人体呼吸道和肠道，也可在环境中发现。该菌是社区获得性和医院获得性感染的重要病原体，可导致肺炎、尿路感染、血流感染（菌血症）、伤口感染、腹腔感染以及中枢神经系统感染等多种严重疾病。近年来，多重耐药（MDR）、广泛耐药（XDR）甚至碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯杆菌（CRKP）的出现和流行，给临床治疗带来巨大挑战，显著增加了发病率和死亡率。因此，快速、准确地对肺炎克雷伯杆菌进行检测、鉴定和药敏试验，对于指导临床合理用药、有效控制感染、遏制耐药菌传播以及保障公共卫生安全具有极其重要的意义。

主要检测项目

针对肺炎克雷伯杆菌的检测项目主要包括：

病原体分离与鉴定： 确认样本中是否存在肺炎克雷伯杆菌，并将其与其他克雷伯菌属或肠杆菌科细菌区分开来。
药物敏感性试验（药敏试验）： 测定分离菌株对常用抗菌药物的敏感性（如β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、碳青霉烯类等），指导临床精准治疗。特别关注ESBLs（超广谱β-内酰胺酶）、AmpC酶和碳青霉烯酶（如KPC, NDM, OXA-48等）的检测。
毒力因子检测： 高毒力肺炎克雷伯杆菌（hvKP）可引起严重社区感染（如肝脓肿、眼内炎、脑膜炎等）。检测相关的毒力基因（如rmpA, rmpA2, iucA, iroB, peg-344, magA/K1/K2等）有助于识别hvKP菌株。
分子分型与溯源： 在暴发调查或院感控制中，运用分子生物学方法（如PFGE, MLST, WGS）对分离株进行同源性分析，追踪传播链条。

常用检测仪器

用于肺炎克雷伯杆菌检测和鉴定的核心仪器包括：

微生物自动鉴定及药敏分析系统： 如VITEK 2 Compact（生物梅里埃）、Phoenix（BD）、MicroScan WalkAway（贝克曼库尔特）等，可自动化进行细菌鉴定和药敏试验，提高效率和标准化程度。
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪： MALDI-TOF MS（如Bruker MALDI Biotyper, VITEK MS）能够通过对细菌蛋白指纹图谱进行快速比对，实现菌种的快速、准确鉴定。
聚合酶链式反应仪： 常规PCR仪用于扩增特定基因（如毒力基因、耐药基因）。实时荧光定量PCR（qPCR）仪用于快速、灵敏地检测特定耐药基因（如blaKPC, blaNDM, blaOXA-48等）或毒力基因。
基因测序平台： 二代测序（NGS）平台（如Illumina, Ion Torrent）用于全基因组测序（WGS），提供最全面的遗传信息，用于菌株精确分型、耐药机制研究、毒力评估和暴发溯源。
酶标仪： 用于显色法或比色法检测β-内酰胺酶（如Carba NP试验、mCIM/eCIM试验）。
微生物培养相关设备： 恒温培养箱、生物安全柜、显微镜（用于革兰染色观察）等基础设备。

核心检测方法

肺炎克雷伯杆菌的检测主要采用以下方法组合：

样本采集与处理： 根据感染部位采集合格样本（痰液、血液、尿液、脓液、脑脊液、组织等），进行涂片革兰染色镜检（初步提示革兰阴性杆菌）和接种到合适的培养基（如血平板、麦康凯平板、显色培养基）进行分离培养。
分离培养与表型鉴定： 观察菌落形态（通常为粘液状菌落），进行氧化酶试验（阴性）、触酶试验（阳性）、IMViC试验（--++或-+-+模式）等生化反应，结合自动化仪器（VITEK, Phoenix）或MALDI-TOF MS进行种水平鉴定。
表型药敏试验： 采用CLSI或EUCAST推荐的微量肉汤稀释法、纸片扩散法（K-B法）或自动化仪器法，测定菌株对各类抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）或抑菌圈直径，判断敏感、中介或耐药。
耐药酶表型检测：
- ESBLs检测： 主要采用双纸片协同试验或CLSI/EUCAST推荐的初筛和确证试验（如头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸组合）。
- 碳青霉烯酶检测：
  - 表型初筛： 基于药敏结果（对碳青霉烯类耐药或中介）。
  - 表型确证： 改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）、乙二胺四乙酸（EDTA）协同改良碳青霉烯灭活试验（eCIM - 区分金属酶）、Carba NP试验（显色法）等。
分子生物学检测：
- 耐药基因检测： 使用多重PCR、实时荧光PCR、基因芯片、宏基因组测序（mNGS）或WGS等方法，直接检测样本或分离株中的特定耐药基因（如blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, blaKPC, blaNDM, blaOXA-48等）。
- 毒力基因检测： 使用PCR、qPCR或WGS等方法检测与高毒力相关的基因。

遵循的主要检测标准

为确保检测结果的准确性、可靠性和可比性，肺炎克雷伯杆菌的检测需严格遵守国内外权威机构发布的标准和指南：

CLSI标准（Clinical and Laboratory Standards Institute）： 每年更新的M100文件《抗菌药物敏感性试验执行标准》是药敏试验的全球金标准之一，包含肺炎克雷伯杆菌的药敏试验方法、解释标准和折点（MIC和抑菌圈直径），以及ESBLs、碳青霉烯酶的筛选和确证试验方法。
EUCAST标准（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）： 欧盟药敏试验标准，同样具有国际影响力，其折点和检测方法指南可在官网获取。EUCAST在耐药机制检测（如碳青霉烯酶）方面也有具体建议。
ISO标准： 国际标准化组织发布的相关标准，如ISO 20776-1/2《临床实验室检测和体外诊断试验系统抗菌剂对感染性疾病病原体的敏感性测试》。
国家卫生健康委员会/国家药监局相关标准： 中国发布的相关行业标准和技术规范，如《抗菌药物敏感性试验的技术要求》、《临床微生物实验室血培养操作规范》、《临床微生物实验室细菌涂片镜检和培养结果报告规范》等。
制造商说明书： 使用自动化仪器（VITEK, Phoenix等）或商品化试剂盒（如PCR检测试剂盒、显色培养基、药敏板条）时，必须严格遵循制造商提供的操作说明书（IFU）进行。

肺炎克雷伯杆菌的准确检测是一个综合运用微生物学、分子生物学技术并严格遵循标准化流程的过程。随着耐药问题日益严峻和高毒力菌株的出现，将传统培养、药敏与先进的分子检测技术（如快速分子诊断、WGS）相结合，并加强对耐药性与毒力机制的研究，对于优化患者管理、指导抗生素合理使用和有效实施感染控制策略至关重要。实验室应持续关注相关标准和技术的更新，确保检测结果的时效性和临床价值。