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嗜热链球菌计数检测

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发布时间：2025-06-30 21:45:42 更新时间：2025-06-29 21:45:42

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

嗜热链球菌计数检测

嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）是乳制品发酵（如酸奶、奶酪）中的关键益生菌，其活菌数量直接影响产品的品质、风味及保健功效。准确检测嗜热链球菌的含量对生产质量控制、产品货架期评估及功能性宣称验证至关重要。检测的核心目标是量化样品（如发酵乳、菌粉、益生菌制剂）中嗜热链球菌的活菌总数（CFU/g或CFU/mL），确保其符合国家标准、行业规范或产品标签标示值。该检测通常在食品企业实验室、第三方检测机构及科研院所进行，涉及从样品前处理到结果判读的全流程标准化操作。

检测项目

检测项目明确聚焦于“嗜热链球菌活菌计数”。这包括：

1. 定量分析： 确定单位质量或体积样品中嗜热链球菌的活菌数量（通常以菌落形成单位 CFU 表示）。
2. 定性验证： 在计数过程中或计数后，对典型菌落进行确认性鉴定（可通过菌落形态、革兰氏染色、过氧化氢酶试验、特定生化反应或分子生物学方法进行），以确保计数的菌落确为嗜热链球菌，而非样品中可能存在的其他类似菌种（如乳酸链球菌）。

检测仪器

嗜热链球菌计数检测需依赖一系列专业仪器设备以保证结果的准确性和重复性：

1. 样品处理设备： 均质器/拍打式均质机（用于固体或半固体样品均质）、无菌均质袋、无菌移液器及枪头、无菌稀释瓶、涡旋振荡器。
2. 培养设备： 恒温培养箱（精确控温至嗜热链球菌最适生长温度，通常设定在37°C、42°C或45°C ± 1°C）、厌氧培养装置（可选，因嗜热链球菌为兼性厌氧菌，但通常在需氧条件下培养即可）。
3. 接种与培养耗材： 无菌培养皿（直径90mm）、无菌吸管（1mL，0.1mL）、无菌涂布棒（L型）、麦康凯琼脂平板、MRS琼脂平板、或更特异的嗜热链球菌选择性/鉴别培养基平板。
4. 菌落计数设备： 菌落计数器（人工计数板或自动菌落计数仪）、记号笔。
5. 灭菌设备： 高压蒸汽灭菌锅、干热烘箱。
6. 辅助设备： 生物安全柜（提供无菌操作环境）、冰箱/冰柜（储存培养基及样品）、pH计（监测培养基pH值）、显微镜（用于形态学确认）。
7. 确认鉴定设备（可选但推荐）： PCR仪、电泳仪（分子生物学鉴定）、API生化鉴定条系统等。

检测方法

国内外广泛采用的标准方法是基于微生物平板计数的倾注平板法或涂布平板法：

1. 样品制备与稀释： 无菌操作称取/量取代表性样品，加入无菌稀释液（如0.85%生理盐水或磷酸盐缓冲液）进行均质。制备一系列（通常10倍）梯度稀释液，如10⁻¹， 10⁻²， 10⁻³ ... 10⁻⁸。
2. 接种：
    - 倾注法： 吸取选定稀释梯度的样品稀释液1mL，注入无菌平皿中，立即倾注约15-20mL、冷却至约45°C的选择性/非选择性固体培养基（如M17琼脂、MRS琼脂，或添加了特定抗生素或指示剂的特异性培养基如ST琼脂），迅速轻轻旋转混匀，待琼脂凝固。
    - 涂布法： 吸取0.1mL或0.2mL选定稀释梯度的样品稀释液，滴加在已凝固的琼脂平板中央，用无菌L型涂布棒均匀涂布开。
3. 培养： 将接种后的平板倒置放入恒温培养箱中，在嗜热链球菌的最适温度（如42°C ± 1°C）下培养48 ± 2小时。
4. 菌落计数：
    - 选取平板上菌落数在30-300 CFU之间的平板进行计数。
    - 嗜热链球菌典型菌落通常为：微小（1-2mm）、圆形、光滑、凸起、边缘整齐、乳白色或不透明。需要在倾注/涂布平板上清晰可见。
    - 必要时，需挑取典型菌落进行革兰氏染色（应为G+球菌，成对或链状排列）、过氧化氢酶试验（应为阴性）或使用特异性更强的鉴别培养基/分子方法（如针对tuf 或 16S rRNA 基因的PCR）进行确认，以确保计数的准确性。
5. 结果计算与报告： 计数结果乘以相应的稀释倍数，最终报告为CFU/g（固体、半固体）或CFU/mL（液体）。

检测标准

嗜热链球菌计数检测必须严格遵循国家或国际标准，确保结果的可比性和法律效力。主要参考标准包括：

1. 中国国家标准 (GB)：
    - GB 4789.35-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》：这是国内最核心的检测标准。该标准明确规定了包括嗜热链球菌在内的乳酸菌（特别是用于发酵的菌种）的检验方法，涵盖了样品处理、培养基选择、培养条件、计数规则及确证试验的具体要求。MRS琼脂培养基和培养于37°C/48小时是其推荐条件之一。
2. 国际标准 (ISO)：
    - ISO 7889:2003 (IDF 117:2003) Yogurt — Enumeration of characteristic microorganisms — Colony-count technique at 37 °C：此国际标准专门针对酸奶中特征微生物（保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）的计数，提供了详细的操作规程，推荐使用M17或其他合适培养基在37°C培养。
3. 其他相关标准：
    - 特定产品标准：如GB 19302《食品安全国家标准发酵乳》对酸奶中的乳酸菌（含嗜热链球菌）活菌数有明确限量要求（如≥1×10^6 CFU/g(mL)）。
    - 企业标准或药典：某些益生菌制剂或特殊用途的嗜热链球菌产品可能依据其注册的企业标准或《中华人民共和国药典》中相关微生物限度检查法进行检测。
关键点： 选择标准时，务必考虑样品的类型（食品、原料、益生菌产品）、检测目的（出厂检验、型式检验、监督抽查）及产品的标签声称或法规要求。实验室资质认定（如CMA/CNAS）也要求使用现行有效的标准方法。

质量控制： 严格执行无菌操作、保证培养基质量（pH、无菌性、促生长能力）、定期进行环境监控、使用标准菌株（如嗜热链球菌ATCC 19258）进行阳性对照、参与实验室间能力验证，是确保检测结果准确可靠的关键环节。