非洲猪瘟诊断技术检测
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发布时间:2025-07-07 04:50:19 更新时间:2025-07-06 04:50:20
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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非洲猪瘟(African Swine Fever,简称ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的高度接触性、致死性传染病,对全球养猪业造成巨大经济损失。该病毒首次于1921年在肯尼亚发现,主要通过直接接触、污染物或蜱虫传播,爆发时可导致猪群死亡率高达100%。近年来,ASF在亚洲、欧洲等地频繁爆发,如2018年中国首次大规模疫情,造成数十亿美元损失。因此,及时准确的诊断技术检测至关重要,它能帮助快速识别感染源、控制疫情扩散、保护生猪产业。诊断检测涉及多个环节,包括样本采集、实验室分析及结果解读。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告疾病,强调早期诊断是防控核心。本文将重点阐述ASF诊断的关键方面,包括检测项目、检测仪器、检测方法和检测标准,以提升对该技术的理解与应用。
非洲猪瘟诊断检测项目主要包括病毒抗原检测、病毒核酸检测和抗体检测三大类。病毒抗原检测针对病毒颗粒本身,通过识别病毒蛋白如p72蛋白来确认感染;病毒核酸检测聚焦于病毒基因组,利用分子生物学方法扩增特定基因片段;抗体检测则用于识别猪体产生的免疫反应,适用于疫情后期或康复猪追踪。具体项目包括:1. 病毒分离培养,用于直接检测活病毒;2. PCR(聚合酶链反应)检测,针对ASFV基因组保守区域;3. ELISA(酶联免疫吸附试验)检测抗体;4. 免疫荧光试验(IFAT)或免疫组化(IHC)检测抗原分布。这些项目需结合临床症状和流行病学调查,确保全面性。根据OIE指南,优先选择核酸检测作为早期诊断,抗体检测用于监测免疫状态。
非洲猪瘟诊断检测依赖于多种高效仪器设备,确保实验精度和效率。关键仪器包括:1. PCR仪(如实时荧光定量PCR仪),用于核酸提取和扩增,常见型号如ABI 7500;2. ELISA阅读器(如酶标仪),用于检测抗体或抗原反应,设备需具备波长调节功能;3. 离心机,用于样本处理如分离血清;4. 生物安全柜(如Class II型),确保操作安全;5. 显微镜(如荧光显微镜),用于IFAT观察抗原-抗体结合;6. 核酸提取仪,自动化提取病毒RNA/DNA;7. 恒温培养箱和冰箱,维持样本稳定性。这些仪器需定期校准和维护,遵循ISO标准。实验室应配备高级别生物安全设施(如BSL-3实验室),防止交叉污染。
非洲猪瘟诊断检测方法多样,根据检测项目选用合适技术。主要方法包括:1. 分子生物学方法,如实时荧光PCR(RT-PCR),步骤包括样本采集(血样或组织)、核酸提取、引物设计(针对ASFV VP72基因)、PCR扩增及荧光信号读取,灵敏度高(可检出10拷贝/μL);2. 血清学方法,如间接ELISA,过程涉及包被抗原、加入待测血清、酶标二抗孵育及底物显色,通过OD值判断抗体水平;3. 病毒分离法,将样本接种Vero细胞或猪巨噬细胞,观察细胞病变或蚀斑形成;4. 快速诊断试纸条(如胶体金免疫层析法),用于现场初筛,操作简便但灵敏度较低。所有方法需严格执行质量控制,包括阴性/阳性对照,并参照OIE手册优化流程。
非洲猪瘟诊断检测标准基于国际权威指南,确保结果可靠性和可比性。核心标准包括:1. OIE《陆生动物诊断试验与疫苗手册》,规定检测方法、性能指标(如灵敏度≥95%,特异性≥98%)和报告要求;2. ISO/IEC 17025实验室认可标准,强调质量管理体系;3. 国家特定标准如中国GB/T 18648-2020,细化样本处理步骤;4. 操作标准如生物安全级别(BSL-2以上)、样本保存条件(-80°C冷冻)。标准要求检测实验室参与能力验证,数据记录完整,并使用标准参考物质(如OIE提供的ASFV阳性样本)。阳性结果需重复验证,并结合流行病学数据综合解读,以避免假阳性或假阴性。
总之,非洲猪瘟诊断技术检测是防控疫情的关键,通过系统性项目、先进仪器、标准化方法和严格标准,实现高效准确的诊断。持续研发新技术如CRISPR检测,将进一步提升响应速度。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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