罗丹明B(碱性玫瑰精B)检测
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发布时间:2025-07-25 22:10:39 更新时间:2025-07-24 22:10:40
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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罗丹明B(Rhodamine B),也被称为碱性玫瑰精B,是一种人工合成的、具有强烈荧光的化学染料。由于其色泽鲜艳、着色力强且价格低廉,历史上曾被用于纺织、皮革、纸张、塑料等工业领域的染色。然而,罗丹明B被证实具有潜在的致癌性、致突变性和肝肾毒性,对人体健康构成严重威胁。因此,它被严格禁止作为着色剂用于食品、化妆品、药品及与人体密切接触的产品中。尽管如此,非法添加罗丹明B(如用于给辣椒粉、调味料等染色)的事件仍时有发生。为了有效监管市场、保障消费者健康、维护公平贸易环境,开展准确、灵敏、可靠的罗丹明B检测工作至关重要。检测的核心目标在于定性(确认样品中是否存在罗丹明B)和定量(确定其残留量是否超标)分析。
罗丹明B检测的主要项目集中在对其存在与否及其含量的分析上,具体应用于不同基质:
1. 食品及农产品: 重点检测对象包括辣椒粉、花椒粉、调味酱料、火锅底料、豆制品、糖果、酒类、饮料等可能存在非法添加风险的食品。检测目标是确认是否含有罗丹明B及其具体含量。
2. 化妆品: 主要筛查口红、胭脂、眼影、指甲油等彩妆产品,防止其作为禁用着色剂被添加。
3. 工业产品与环境样品: 包括纺织品、皮革制品、纸张、塑料制品、玩具等,以及可能受染料污染的水体、土壤等环境样本。
4. 定性确认与定量分析: 核心任务是鉴定样品中是否存在罗丹明B(定性),并精确测定其残留量(定量,通常以毫克/千克 mg/kg 或微克/千克 μg/kg 表示)。
罗丹明B的痕量分析依赖于高灵敏度和高选择性的现代分析仪器:
1. 高效液相色谱仪 (HPLC): 这是目前检测罗丹明B最常用和最权威的仪器,尤其与检测器联用时。
2. 紫外-可见分光光度检测器 (UV-Vis): 常与HPLC联用(HPLC-UV),基于罗丹明B在特定波长(如550 nm附近)有强吸收进行定量检测。操作相对简便,成本较低。
3. 荧光检测器 (FLD): 与HPLC联用(HPLC-FLD)是检测罗丹明B的首选和推荐方法。罗丹明B具有极强的荧光特性(激发波长~550 nm,发射波长~580 nm),FLD能提供极高的灵敏度和选择性,显著降低基质干扰,检出限更低。
4. 液相色谱-串联质谱仪 (LC-MS/MS): 提供极高的选择性和准确性,尤其适用于复杂基质(如油脂含量高的调味料)中罗丹明B的确证性检测和痕量分析。通过多级质谱扫描,能获得特征碎片离子,进行定性和定量,是公认的确证方法。
5. 样品前处理设备: 包括精密天平、高速匀浆机/粉碎机、超声波提取仪、离心机、旋转蒸发仪、氮吹仪、固相萃取装置(SPE)及其配套的净化柱(如C18、MCX、HLB等)。这些设备对于从复杂样品基质中有效提取、净化和浓缩目标物至关重要。
罗丹明B的检测方法通常包含样品前处理和仪器分析两大步骤:
1. 样品前处理: * 提取: 根据样品性质(如辣椒粉、油脂、饮料等),选择合适的溶剂(常用乙腈、酸性乙腈、甲醇或混合溶剂)进行震荡提取、超声提取或索氏提取。目标是尽可能完全地将罗丹明B从基质中溶解出来。 * 净化: 提取液通常含有大量干扰物质(色素、油脂、蛋白质等),需进行净化。最常用的是固相萃取法。根据样品基质选择合适的SPE柱(如C18用于一般去除杂质,MCX用于去除碱性干扰物),通过调节上样溶剂和洗脱溶剂,选择性保留或洗脱目标物,去除杂质。 * 浓缩与定容: 净化后的洗脱液体积较大,浓度低,需通过氮吹、旋转蒸发等方法浓缩,并用合适的溶剂(如甲醇、乙腈或流动相)定容至小体积,以满足仪器进样和检测灵敏度要求。
2. 仪器分析: * HPLC-FLD法: 这是目前国内外标准(如中国国家标准GB)推荐的常用方法。 * 色谱条件: 通常使用反相C18色谱柱;流动相为乙腈-水或乙腈-缓冲盐溶液(如乙酸铵),采用等度或梯度洗脱模式;流速约为0.8-1.0 mL/min;柱温通常为30-40°C。 * 检测条件: 荧光检测器设定激发波长(Ex)为550 nm左右,发射波长(Em)为580 nm左右。在此条件下,罗丹明B能产生最强的荧光响应。 * 定量: 通过比较样品峰面积与标准溶液峰面积,用外标法进行定量分析。 * LC-MS/MS法: 主要用于确证或复杂基质样品分析。 * 色谱条件: 类似HPLC,常选用C18柱,流动相常用乙腈/水(含0.1%甲酸或甲酸铵)。 * 质谱条件: 采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式([M]+, m/z 443.2)。选择特征母离子和子离子进行多反应监测(MRM),例如母离子 m/z 443.2 → 子离子 m/z 399.2, 355.2, 327.2等。 * 定性与定量: 根据保留时间、特征离子对及其相对丰度比进行定性确证;利用特征离子对峰面积,用标准曲线进行定量。
国内外均有权威机构制定了罗丹明B的检测标准,为检测工作提供规范依据:
1. 中国国家标准 (GB): * GB 31660.3-2019 《食品安全国家标准 水产品中罗丹明B的测定 液相色谱-串联质谱法》: 适用于水产品中罗丹明B的测定(LC-MS/MS法)。 * GB/T 23496-2009 《食品中禁用物质的检测 碱性橙染料 高效液相色谱法》: 该标准虽然主要针对碱性橙,但其原理(HPLC法)和部分前处理方法也常作为参考用于检测罗丹明B。许多食品领域实验室依据此标准或其修订版/补充方法进行罗丹明B检测(常用HPLC-FLD法)。部分行业或地方标准也可能直接引用或参照此法。 * SN/T 2430-2010 《进出口食品中罗丹明B的检测方法》: 规定了进出口食品中罗丹明B的HPLC-FLD和LC-MS/MS检测方法。
2. 其他重要参考标准: * 国家食品药品监督管理总局(现国家市场监督管理总局)历年发布的《国家食品安全监督抽检实施细则》中会规定当年度罗丹明B检测的具体方法(通常是HPLC-FLD或LC-MS/MS)及判定依据(通常为不得检出)。 * 欧盟法规: 罗丹明B在食品和化妆品中是明确禁用的。相关指令如化妆品指令76/768/EEC(现被EC No 1223/2009替代)和食品接触材料框架法规(EC) No 1935/2004等均禁止其使用。检测方法常参考欧盟官方或欧盟标准组织(CEN)的方法。 * 日本肯定列表制度: 明确规定罗丹明B等工业染料在食品中不得检出。
判定依据: 在食品安全领域,中国大陆通常的判定依据是“不得检出”。这意味着在方法的检出限(LOD)或定量限(LOQ)下,不应检测到罗丹明B的存在。因此,方法的灵敏度至关重要。标准中通常会明确方法的LOD/LOQ值。
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