甲氧苄啶（甲氧苄氨嘧啶/三甲氧苄胺嘧啶）检测技术概述

甲氧苄啶（Trimethoprim，TMP），又称甲氧苄氨嘧啶或三甲氧苄胺嘧啶，是一种人工合成的广谱抗菌药，属于二氢叶酸还原酶抑制剂。它常与磺胺类药物（如磺胺甲噁唑）联用（复方新诺明），通过双重阻断细菌叶酸代谢途径，显著增强抗菌效果。在畜牧业和水产养殖中，甲氧苄啶也被广泛应用以防治细菌性疾病。然而，其不合理使用可能导致在动物源性食品（如肉类、蛋类、奶类、水产品）及环境中残留，长期低剂量摄入可能对人体健康产生潜在风险，如干扰肠道菌群、诱导细菌耐药性等。因此，建立灵敏、准确、高效的甲氧苄啶残留检测方法，对保障食品安全、维护消费者健康、确保进出口贸易符合法规要求至关重要。全球主要国家和地区（如中国、欧盟、美国、日本）均制定了严格的甲氧苄啶在各类食品中的最大残留限量（MRLs）。

检测项目

甲氧苄啶的检测主要聚焦于其在各类基质中的残留量分析，核心项目包括：

1. 动物源性食品：肌肉组织（猪、牛、羊、禽等）、肝脏、肾脏、脂肪、蛋类、乳及乳制品（牛奶、奶粉、奶酪等）、水产品（鱼、虾、蟹等）中的甲氧苄啶残留量测定。

2. 其他食品：蜂蜜中的甲氧苄啶残留检测（蜜蜂养殖中可能使用）。

3. 饲料：配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料及饲料原料中甲氧苄啶的添加量或残留量监控。

4. 环境样品：水体（养殖废水、地表水）、土壤中甲氧苄啶的污染状况监测。

检测仪器

甲氧苄啶残留检测的核心依赖于高灵敏度和高选择性的分析仪器：

1. 液相色谱-串联质谱仪 (LC-MS/MS)：这是当前检测甲氧苄啶及其他抗菌药物残留的金标准仪器。液相色谱（LC）实现复杂基质中甲氧苄啶的有效分离，串联质谱（MS/MS）通过选择反应监测（SRM）或多反应监测（MRM）模式，提供极高的选择性和灵敏度，能准确定量和确证目标物。

2. 高效液相色谱仪(HPLC) 与紫外/二极管阵列检测器(UV/DAD)：作为一种经济有效的替代方案，HPLC-UV/DAD 也常用于甲氧苄啶的常规筛选和定量分析，但其灵敏度和抗基质干扰能力通常低于LC-MS/MS。

3. 样品前处理设备： - 高速冷冻离心机：用于样品均质、提取液分离。 - 涡旋混合器/振荡器：用于样品提取过程中的充分混匀。 - 固相萃取(SPE)装置：配备真空泵，用于复杂样品中甲氧苄啶的净化和富集（常用C18、HLB、MCX等填料）。 - 氮吹仪：用于浓缩提取液。 - 分析天平：精确称量样品和试剂。 - pH计：控制提取和净化过程中的酸碱度。

4. QuEChERS装置：快速、简便、经济、高效、耐用、安全的样品前处理技术所需的相关离心管、盐包、分散固相萃取填料等。

检测方法

甲氧苄啶的检测流程主要包括样品前处理和仪器分析两大步骤：

1. 样品前处理： - 提取：将代表性样品均质后，通常使用有机溶剂（如乙腈、酸化乙腈、甲醇）或缓冲溶液进行振荡/超声提取，以将目标物从基质中溶解出来。常加入EDTA、Na₂EDTA等螯合剂结合金属离子，提高回收率。 - 净化：提取液往往含有大量干扰物质（脂肪、蛋白、色素等），需要进行净化去除。常用方法包括： * 液液萃取(LLE)：利用目标物在不同溶剂中的分配系数差异进行分离。 * 固相萃取(SPE)：利用吸附剂选择性吸附目标物或杂质，再选择性洗脱目标物。C18、亲水亲脂平衡柱（HLB）、混合阳离子交换柱（MCX）是常用填料。 * QuEChERS法：特别适用于果蔬、肉类等基质，操作快速简便。通常先加乙腈（含酸）提取，再通过加入MgSO₄、NaCl等盐析除水，最后利用PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）、C18、GCB（石墨化碳黑）等分散固相萃取吸附剂净化。

2. 仪器分析： - LC-MS/MS分析： * 色谱分离：常用反相C18或C8色谱柱，流动相多为水（含0.1%甲酸或甲酸铵缓冲液）和甲醇或乙腈梯度洗脱。 * 质谱检测：采用电喷雾离子源（ESI+），甲氧苄啶易质子化形成[M+H]⁺离子（m/z 291）。选择特征母离子，通过碰撞诱导解离（CID）产生子离子（如m/z 261，230），在MRM模式下进行高灵敏度、高选择性检测。

- HPLC-UV/DAD分析：通常在270-280 nm附近波长处检测甲氧苄啶特征紫外吸收峰。色谱柱和流动相选择与LC类似。

检测标准

国内外针对甲氧苄啶残留检测制定了多项标准方法，为检测提供规范和依据：

1. 中国国家标准(GB)和行业标准： - GB 31650-2021 《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》：规定了甲氧苄啶在各类可食动物组织中的MRLs。 - GB/T 21330-2022 《动物源性食品中甲氧苄啶残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》：规定了使用LC-MS/MS检测动物肌肉、内脏、水产品等中TMP的标准方法。 - 农业农村部公告 第316号 《动物性食品中兽药最大残留限量》：包含甲氧苄啶限量标准。 - SN/T 2538-2010 《进出口动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（适用于甲氧苄啶即三甲氧苄氨嘧啶）。

2. 国际标准： - 欧盟(EU)：欧盟委员会法规 (EU) No 37/2010 规定了食品动物源产品中甲氧苄啶的MRLs。推荐方法常参考欧盟决议2002/657/EC关于质谱确证方法性能准则。 - 美国食品药品监督管理局(FDA)：Pesticide Analytical Manual (PAM) 或相关行业指南中可能包含相关方法，并设定其允许限量。 - 国际食品法典委员会(CAC)：CODEX STAN 193-1995 (Rev.) 《食品和饲料中污染物和毒素通用标准》及其附录中可能涉及相关限量或方法指南。

3. 药典方法：如《中华人民共和国药典》中对于甲氧苄啶原料药及其制剂的质量控制方法（通常为HPLC-UV）。

小结

甲氧苄啶（甲氧苄氨嘧啶/三甲氧苄胺嘧啶）的精准检测是保障食品安全、评估环境风险、确保合规贸易的关键环节。以LC-MS/MS为核心的高灵敏度、高特异性分析技术，结合高效、可靠的样品前处理方法（如SPE、QuEChERS），并严格遵循国内外权威标准（如GB/T 21330、欧盟标准），构成了当前主流检测体系。持续优化检测方法的灵敏度、通量、成本效率和环保性，对应对日益增长的监管需求和复杂基质挑战具有重要意义。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日