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生物相互作用检测

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发布时间：2025-08-04 20:27:34 更新时间：2025-08-03 20:27:34

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

生物相互作用检测：揭示生命分子间的对话

生物相互作用检测是指利用一系列科学方法和技术手段，定性和定量地研究生物大分子（如蛋白质、核酸、碳水化合物、脂质以及小分子配体等）之间特异性识别、结合以及由此引发生物学效应（如构象变化、信号传导、复合物形成、酶催化活性调节等）的过程。这种相互作用构成了生命活动的核心基础，从基因表达调控、细胞信号转导、免疫应答到药物作用机制，都依赖于精准的分子间识别与结合。深入理解这些相互作用对于基础生物学研究、药物靶点发现与验证、药物筛选与优化、诊断试剂开发以及生物制品质量控制等领域具有至关重要的意义。它使我们能够解析复杂的生命网络，揭示疾病的分子机制，并最终推动精准医疗和生物医药产业的进步。

核心检测项目

生物相互作用检测涵盖广泛的研究目标，主要包括：

蛋白质-蛋白质相互作用：研究两个或多个蛋白质之间是否结合、结合的强度（亲和力）、速率（动力学）以及形成的复合物结构。
蛋白质-核酸相互作用：探究转录因子、核酶等蛋白质与DNA或RNA的结合特异性、结合位点及调控功能。
蛋白质-小分子相互作用：鉴定药物先导化合物、代谢物、辅因子等小分子与靶蛋白的结合，用于药物筛选和机制研究。
核酸-核酸相互作用：研究DNA-DNA杂交、RNA-RNA配对及反义核酸作用等。
受体-配体相互作用：分析细胞表面受体（如GPCRs、激酶受体）与其天然配体或合成药物的结合特性。
抗原-抗体相互作用：评估抗体对抗原的特异性识别能力和结合强度，是免疫分析和诊断的核心。
酶-底物/抑制剂相互作用：测量酶催化活性、酶促反应动力学以及抑制剂对酶活性的影响。

关键检测仪器

现代生物相互作用检测高度依赖精密仪器，主要设备包括：

表面等离子共振仪：利用光在金属表面激发的等离子波对表面折射率变化的敏感性，实时、无标记检测分子结合和解离过程，提供动力学参数。
生物膜干涉技术仪：基于白光干涉原理，实时测量生物分子结合到传感器表面引起的膜层厚度变化，用于无标记相互作用分析。
等温滴定量热仪：直接测量分子结合过程中释放或吸收的热量，提供结合常数、焓变、熵变和化学计量比等热力学参数。
微量热泳动仪：基于分子在温度梯度场中的定向迁移速度变化（与分子大小、电荷、水化层有关）来检测分子间相互作用。
酶标仪：广泛应用于基于比色、荧光、化学发光等标记方法的相互作用检测，如ELISA、荧光偏振等。
荧光光谱仪/荧光偏振仪：利用荧光标记分子的荧光强度、寿命、偏振等变化来研究相互作用。
圆二色谱仪：通过检测手性分子对左右圆偏振光吸收的差异，研究蛋白质等大分子的构象变化。
分析型超速离心机：通过沉降速度或沉降平衡实验分析溶液中分子的聚集状态、分子量、组成和结合常数。

常用检测方法

生物相互作用检测方法多样，根据原理可分为：

无标记技术：
- 表面等离子共振
- 生物膜干涉技术
- 等温滴定量热法
- 微量热泳动
- 分析超速离心
标记技术：
- 酶联免疫吸附试验
- 荧光偏振/各向异性
- 荧光共振能量转移
- 时间分辨荧光
- 生物素-亲和素/链霉亲和素系统
- 放射配体结合实验
基于细胞的检测：
- 双分子荧光互补
- 荧光素酶报告基因检测
- 邻近连接实验
- 共免疫沉淀
- Pull-down 实验

重要检测标准

为确保生物相互作用数据的可靠性、准确性和可比性，遵循相关标准至关重要：

ISO/IEC 17025:2017：《检测和校准实验室能力的通用要求》。这是实验室质量管理体系的国际金标准，适用于所有进行生物检测的实验室。
药典标准：各国药典（如USP, EP, ChP）中收录的相关生物活性/效力测定方法、蛋白质相互作用分析方法等，具有法定效力。
ICH 指导原则：国际人用药品注册技术协调会发布的Q系列（质量）指导原则，如Q2(R1)分析程序验证、Q6B生物技术产品质量标准建立等，涉及生物制品活性测定（常基于相互作用）的方法验证。
仪器制造商标准操作规程：仪器设备厂商提供的标准操作流程、维护保养及校准规范。
方法学验证指南：进行任何生物相互作用检测方法开发后，需要按照相关指南（如ICH Q2(R1)）进行验证，确认其特异性、准确性、精密度、线性范围、检测限、定量限和耐用性等是否符合要求。
数据报告规范：对于特定技术（如SPR），有推荐的报告格式，以确保关键参数（如实验条件、结合曲线、动力学拟合结果）透明呈现。