仙草多糖检测：原理、方法与质量控制要点

仙草（Mesona chinensis Benth.）作为一种药食同源植物，其多糖成分因具有抗氧化、免疫调节、降血糖等多种生物活性而备受关注。准确检测仙草多糖含量对于质量控制、功效研究及产品开发具有关键意义。本文将系统阐述仙草多糖检测的核心方法与技术要点。

一、检测方法概述

目前主流的检测方法可分为化学显色法和仪器分析法两大类：

1. 化学显色法：
• 苯酚-硫酸法（GB 5009.8-2016改良法）
• 蒽酮-硫酸法（适用于微量检测）
• 3,5-二硝基水杨酸法（DNS法，多用于还原糖测定）

2. 仪器分析法：
• 高效液相色谱法（HPLC，配示差折光检测器）
• 紫外-可见分光光度法（需结合显色反应）
• 近红外光谱快速检测（适用于工业化在线检测）

二、苯酚-硫酸法标准操作流程

1. 标准曲线制备：
配制葡萄糖标准溶液（0-100 μg/mL），加入5%苯酚溶液1 mL和浓硫酸5 mL，沸水浴显色20分钟，测定490 nm吸光度。

2. 样品处理：
• 原料粉碎过80目筛
• 水提醇沉法提取（料液比1:30，90℃提取2h）
• Sevag法除蛋白（氯仿:正丁醇=4:1）
• 透析除小分子物质（截留分子量3500 Da）

3. 检测计算：
样品显色后按标准曲线计算总糖含量，通过β-消去反应测定糖醛酸含量，总多糖=总糖-单糖-寡糖。

三、关键质量控制点

1. 干扰排除：
• 色素干扰：采用活性炭吸附或聚酰胺柱纯化
• 蛋白质干扰：至少进行3次Sevag法处理
• 无机离子干扰：透析时间需＞48小时

2. 方法验证：
• 加标回收率应控制在95%-105%
• 相对标准偏差（RSD）＜3%
• 显色体系需严格控温（±1℃）

3. 仪器校准：
分光光度计需每日进行基线校正，HPLC系统需定期进行柱效测试（理论塔板数＞3000）。

四、方法选择建议

科研级检测推荐采用HPLC-RID法结合分子量排阻色谱，可同时测定多糖组成与分子量分布。企业常规检测宜选用改良苯酚-硫酸法，成本低且重现性好（RSD＜2.5%）。值得注意的是，不同提取工艺（如超声辅助、酶法提取）可能影响显色反应效率，需建立对应的校正因子。

随着检测技术的进步，UPLC-ELSD联用技术（超高效液相色谱-蒸发光散射检测）逐渐成为精准定量新趋势，其检测限可达0.01 μg/mL，特别适用于复杂基质中微量多糖的测定。无论采用何种方法，严格的质量控制体系和标准操作程序（SOP）都是确保检测结果准确可靠的根本保障。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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