聚酯/低密度聚乙烯药品包装用复合膜、袋微生物限度（细菌数、霉菌和酵母菌数、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）检测_【CMA/CNAS认证】

聚酯/低密度聚乙烯药品包装用复合膜、袋系直接接触药品的药用包装材料，其微生物负荷与包装内药品质量密切相关。微生物限度检测涵盖需氧菌总数、霉菌和酵母菌数两项计数指标，以及大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌三项控制菌检查。检测依据药包材微生物限度检查法的一般要求执行，全程遵循无菌操作与阴性对照原则，据此评价复合膜、袋的生物负载水平，判定其是否符合药用包装的卫生学要求。

检测原理与机制

微生物限度检测基于薄膜过滤法与平皿培养法两类基本原理。供试液经处理后的微生物，在适宜培养基与温度条件下得以复苏并形成肉眼可见菌落，依据菌落形成单位进行定量；控制菌检查则依据目标菌的生化特性与形态特征，经增菌、选择性分离、生化鉴定或血清学试验予以确证。聚酯/低密度聚乙烯复合膜、袋表面微生物经含吐温类表面活性剂及组氨酸的冲洗液充分洗脱，转入液体培养基中完成后续检验。整个流程设置阴性对照以排除环境与操作引入的污染干扰。

检测对象与适用范围

检测对象为聚酯/低密度聚乙烯复合工艺制成的药品包装用复合膜、袋，卷状膜材与已制成袋型的包装形式。此类材料多用于口服固体制剂、颗粒剂等药品的直接接触包装。检测项目细菌数、霉菌和酵母菌数两项计数指标，以及大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌三项控制菌。样品应以完整、洁净、未经使用的包装状态送检，取样时须避免手部及器具对接触面的二次污染。同类结构的复合膜材亦可参照本方法开展限度检查。

样品制备与供试液制备

取样在洁净条件下进行，以无菌操作剪取规定面积的复合膜、袋样品，置于含玻璃珠的灭菌容器内。加入适量pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或薄膜冲洗液，必要时添加适量吐温80与组氨酸以提升洗脱效率。充分振摇，使表面附着的微生物游离于液体中，形成供试液。供试液应在制备后尽快检验。同批样品须制备相应阴性对照液，即以同批冲洗液替代样品平行操作，用以监控试剂、器具与环境本底。全部器具均须经灭菌处理并记录灭菌参数。

菌落计数法测定细菌及霉菌酵母菌

细菌数测定采用胰酪大豆胨琼脂培养基，霉菌和酵母菌数测定采用沙氏葡萄糖琼脂培养基。供试液经适宜稀释后，可采用平皿倾注法、涂布法或薄膜过滤法接种。薄膜过滤方式适用于抑菌性较强的膜材样品，滤膜经冲洗后贴于培养基表面培养。细菌计数平皿置30～35℃培养不少于规定时长，霉菌酵母菌平皿置20～25℃培养。计数时以肉眼观察并借助放大镜或菌落计数器核对，取符合计数规则平皿的平均菌落数，乘以稀释倍数换算为每单位面积或每件样品的菌落数。

控制菌检查——大肠埃希菌等五项指标

控制菌检查采用增菌、分离、鉴定三段式流程。大肠埃希菌检查以胰酪大豆胨液体培养基增菌，转种麦康凯琼脂平板分离，可疑菌落经生化试验或适宜鉴定系统确证。金黄色葡萄球菌检查经胰酪大豆胨液体培养基增菌后，以甘露醇氯化钠琼脂分离，血浆凝固酶试验为关键确证手段。铜绿假单胞菌检查以溴化十六烷基三甲铵琼脂选择性分离，结合氧化酶试验与绿脓菌素测定判定。各项目均须设置阳性对照与阴性对照，阳性对照菌应生长良好，否则该次检验结果无效。

检测流程与结果判定标准

完整流程样品接收与状态确认、洁净环境准备、供试液制备、计数培养、控制菌检查、菌落观察与鉴定、数据换算及报告审核。计数结果按各平板菌落数取平均值并乘以稀释倍数报告；控制菌以检出与否判定。若阴性对照出现菌落生长，应排查污染来源后重新检验。最终依据药包材微生物限度标准对细菌数、霉菌和酵母菌数及三项控制菌逐项判定，任何一项超出限度即判为不符合。检验记录须完整保存培养条件、菌落数与确证试验过程。