API ZYM 酶学特性测定

API ZYM 是一种半定量微量酶学检测系统，用于测定微生物菌株产生的 19 种胞外酶与细胞内酶的活性谱。检测对象涵盖细菌、放线菌、真菌等多种可培养微生物。检测流程菌液制备、试剂条接种、恒温孵育与显色反应四个环节，最终依据色强等级绘制酶谱，据此分析菌株的代谢能力与分类鉴定特征。该系统操作简便、重复性较好，广泛应用于菌种鉴定、功能筛选与生态学研究领域。

检测原理与机制

API ZYM 系统的检测基础为酶—底物特异性反应。试剂条各杯状小杯中预置有干燥的不溶性色原底物，菌株产生的特定水解酶作用于对应底物后，底物水解释放呈色基团或可反应产物。随后加入显色剂，反应产物与显色剂发生偶联显色，形成可目视比色的色斑。颜色深浅与酶活性高低呈正相关，据此实现半定量判读。该机制不依赖菌株生长繁殖，仅反映菌体预先合成的酶活性状态。

检测原理与酶谱系统构成

标准 API ZYM 试剂条包含 20 个杯状反应杯，其中 19 个为酶底物反应杯，1 号杯为阴性对照杯。检测酶类涵盖碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、亮氨酸芳基酰胺酶、缬氨酸芳基酰胺酶、半胱氨酸芳基酰胺酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、酸性磷酸酶、磷酸酰胺酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、N-乙酰-β-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等多类水解酶。各杯显色结果依次记录，构成菌株特异性酶谱。

样品制备与菌液浓度要求

样品制备以获得新鲜、纯培养的菌体为前提。细菌一般采用适宜培养基平板，于适温条件下培养 24 至 48 小时；真菌与放线菌可适当延长培养时间。挑取新鲜菌落悬浮于无菌蒸馏水或专用稀释液中，以麦氏比浊法调节菌液浓度，常规要求达到 5 至 6 麦氏单位左右的浓菌悬液。浓菌液可以生理盐水稀释后用于其他配套试剂条，而 API ZYM 本身须使用浓菌悬液直接接种，以保证足量酶量参与反应。

显色测定操作流程

操作时将试剂条平置于湿盒内，用滴管吸取浓菌悬液，依次接入各反应杯，每杯接入量约为 50 至 80 微升，注意避免产生气泡与交叉污染。接入完毕后将湿盒置于 37 摄氏度条件下孵育 4 至 4.5 小时。孵育结束后，逐杯加入 ZYM A 与 ZYM B 显色剂各一滴，静置 5 分钟待颜色充分显色。显色期间避免阳光直射与强光照射，防止颜色消退影响判读。显色完全后立即记录各杯色强，超时判读可能引起结果偏差。

酶活性判读与结果分级

判读依据为各反应杯的色强等级，采用 0 至 5 级半定量标准：0 级呈阴性，颜色深度与 1 号对照杯相当；1 级为极弱阳性，色强约相当于 5 纳摩尔活性水平；2 级、3 级、4 级依次对应 10、20、30 纳摩尔量级；5 级为最强反应，相当于 40 纳摩尔或以上活性。判读时将待测杯颜色与读数尺逐一比对，记录各酶的等级数值，形成由 19 位数值组成的酶谱编码，据此比对数据库或文献图谱进行菌株鉴定与特性分析。

应用场景与送检须知

该系统适用于多种可培养微生物的酶学特性研究，常见应用细菌属种水平的辅助鉴定、功能菌株产酶能力筛选、土壤与水体微生物群落的酶活性比较，以及发酵工业菌株的代谢特性评价。送检前须保证菌株为纯培养物，注明培养条件与培养基类型，避免混合菌污染导致酶谱混乱。样本可送至具备相应检测能力的专业实验室完成测定，亦可由研究人员依照标准操作规程自行开展，全程遵循无菌操作规范。

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