体外诊断检验系统性能评价方法第3部分：检出限与定量限检测_【CMA/CNAS认证】

体外诊断检验系统性能评价方法第3部分聚焦检出限与定量限两项核心分析性能指标，适用于免疫层析、ELISA、PCR、化学发光等多类体外诊断试剂与仪器的评价。本文按检测原理、概念界定、样品制备、空白法与Probit法测定、定量限验证及报告要点的顺序展开，阐明低浓度区间的检测能力评价路径。规范的检出限与定量限检测可直接反映系统对痕量待测物的识别与定量能力，是产品注册与性能确认的重要技术内容。

检测原理与机制

检出限评价的实质，是考察检测系统在低浓度区间区分信号与噪声的能力。以ELISA为例，其机制在于待测物浓度趋近于零时，吸光度响应与本底噪声重叠，需以统计学方法划定可判定为阳性的最小信号阈值。PCR体系则依赖扩增曲线的荧光信号判定，痕量靶标产生的荧光增量须超过背景波动方可判为检出。化学发光与分光光度法同理，均以测量信号偏离空白分布的程度作为判定基础。测定时配制浓度梯度递减的系列样品，重复检测后建立浓度与检出概率的对应关系，据此确定系统可稳定识别的最低水平。

检出限与定量限概念界定

检出限指给定条件下可检出待测物的最小浓度或量，此时检出概率达到预设水平，仅回答有无问题，不要求准确定量。定量限则指能够以可接受的精密度与正确度定量测定待测物的最低浓度，其核心在于该浓度点重复测量的变异系数与偏倚须满足既定接受标准。两者的本质差异在于用途：前者用于阴性、阳性判定，后者用于定量报告的浓度下限。评价报告中应明确各自的定义口径、统计模型与置信水平，避免将二者混用。

样品制备与定标品要求

低浓度样品制备须以经定值的基质匹配样品为起点，采用空白基质逐级稀释获得浓度梯度系列。稀释过程应遵循独立配制原则，不得以同一母液连续倍比稀释后直接使用，以规避累积误差。空白样品应选取经确认不含待测物的真实基质，其成分与实际检测样本一致。定标品应可溯源至上级参考物质，纯度、均匀性与稳定性经确认后方可使用。梯度设置应覆盖预估检出限附近的浓度区间，各浓度点不少于规定数量的平行管，且整个制备与分装过程防止污染与蒸发损失。

空白法与Probit法测定检出限

空白法以多份空白样品的重复检测为基础。实验室对不少于二十份空白样品进行多次测定，计算空白响应的均值与标准差，以均值加若干倍标准差对应的浓度作为检出限估计值。该方法操作简便，适用于信号分布接近正态的体系，但其结果与空白基质的代表性密切相关。Probit法属于概率模型法，将接近检出限的多个低浓度样品各重复检测多次，统计各浓度的阳性检出率，再以Probit回归拟合浓度与检出概率的剂量反应曲线，读取特定检出概率对应的浓度值。该方法直接刻画检出概率随浓度的变化，更贴近实际判定过程。两种方法可互为补充，方法选择须在方案中预先规定。

定量限验证方法与步骤

定量限验证围绕精密度与正确度两个维度展开。第一步，在预估定量限浓度水平制备多批次独立样品，跨越多日、由不同操作者与不同仪器通道完成检测，采集不少于规定数量的重复数据。第二步，计算该浓度点重复测量的均值、标准差与变异系数，判断精密度是否满足方案预设的接受限度。第三步，以参考方法定值或定标品配制值为比对基准，计算回收率或相对偏倚，评估正确度。必要时可在定量限至数倍定量限之间增设浓度点，验证整个低浓度区间的定量能力。全部原始数据、统计过程与结论均须可追溯。

性能指标判定标准与步骤外报告要点

判定时应依据产品声称的预期用途确定接受准则，定量免疫类产品通常以变异系数与偏倚的双重限度约束定量限，定性产品则以检出概率达到预设水平界定检出限。报告须包含以下要素：检测方法与仪器试剂信息、样品来源与配制过程、空白法或Probit法的统计模型与参数、原始数据汇总表、检出限与定量限的最终量值及其置信区间。同时应说明检测条件、操作者、日期与环境条件，注明方法的局限性与适用范围。声明的性能指标不得优于实测结果，注册资料与说明书中的限值表述应与验证数据一致。