γ-谷氨酰基转移酶测定试剂(盒)(GPNA)底物法检测
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发布时间:2025-04-23 16:10:42 更新时间:2025-05-13 19:13:24
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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γ-谷氨酰基转移酶(γ-Glutamyl Transferase, GGT)是一种广泛分布于人体组织中的酶类,尤其在肝脏、肾脏及胰腺中活性较高。在临床诊断中,血清GGT水平的检测被广泛应用于肝胆系统疾病的筛查、诊断及疗效监测,特别是酒精性肝病、胆汁淤积、胆道梗阻等疾病的鉴别诊断中具有重要价值。此外,GGT与碱性磷酸酶(ALP)联合检测可进一步提高肝胆疾病诊断的特异性。
GPNA(L-γ-谷氨酰-对硝基苯胺)底物法是当前主流的GGT活性检测方法之一。其原理基于GGT催化底物GPNA与甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly)的转移反应,生成对硝基苯胺(pNA),该产物在405 nm波长处具有特征性吸光度变化,通过测定吸光度变化速率可计算GGT活性。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优势,适用于全自动生化分析仪的大规模样本检测。
GGT检测的核心目标是测定血清或血浆中酶的活性单位(U/L)。检测项目需明确以下临床适应症: 1. 肝胆疾病的辅助诊断(如肝炎、肝硬化、肝癌); 2. 酒精性肝损伤的评估; 3. 药物性肝毒性的监测; 4. 胆道梗阻与胆汁淤积的鉴别诊断。
基于GPNA底物法的GGT检测需依赖以下关键仪器: 1. 全自动生化分析仪:用于实现样本加样、试剂混合、反应孵育及吸光度检测的自动化流程; 2. 分光光度计:单机检测时用于405 nm波长下吸光度的精确测定; 3. 恒温水浴箱或温控模块:确保反应体系温度稳定(通常为37℃); 4. 离心机:用于分离血清样本中的细胞成分。
检测过程需严格遵循试剂盒说明书及实验室标准化操作程序(SOP): 1. 样本处理:采集静脉血后离心分离血清,避免溶血或脂血干扰; 2. 试剂配制:按比例复溶底物缓冲液(含GPNA与Gly-Gly); 3. 反应体系建立:将样本与试剂按预设比例混合,启动酶促反应; 4. 吸光度监测:在405 nm波长下连续测定吸光度变化(△A/min),计算酶活性; 5. 结果校准:通过标准品或质控品进行曲线校准,确保结果准确性。
为确保检测结果的可靠性,需遵循以下标准与规范: 1. 国际标准:参考国际临床化学联合会(IFCC)推荐的GGT测定方法; 2. 行业标准:符合《医疗机构临床生化检验试剂盒质量评价指南》要求; 3. 试剂盒性能验证:包括线性范围(通常为0-1000 U/L)、精密度(CV<5%)、准确度(回收率90%-110%)等; 4. 室内质控与室间质评:每日运行高、低值质控品,参与外部质量评估计划。
GPNA底物法作为GGT检测的经典方法,凭借其高灵敏度和良好的抗干扰能力,已成为临床实验室的常规检测手段。通过规范化的操作流程、标准化的仪器校准及严格的质量控制体系,可有效保障检测结果的准确性与可比性,为肝胆疾病的精准诊疗提供可靠依据。
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