γ-谷氨酰基转移酶测定试剂(盒)(GPNA底物法)检测
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发布时间:2025-04-24 16:40:43 更新时间:2025-04-23 16:40:44
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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γ-谷氨酰基转移酶(γ-Glutamyl Transferase, γ-GT)是一种广泛分布于人体组织中的酶,尤其在肝胆系统、肾脏和胰腺中活性较高。血清中γ-GT的活性水平是临床诊断肝胆疾病、酒精性肝损伤以及胆汁淤积的重要生物标志物。通过GPNA(L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺)底物法测定γ-GT活性,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优势,已成为临床实验室常规检测项目之一。该方法的检测结果可为肝炎、肝硬化、胆道梗阻等疾病的诊断、治疗监测及预后评估提供关键依据。
γ-谷氨酰基转移酶测定试剂盒(GPNA底物法)主要用于定量检测人体血清或血浆中的γ-GT酶活性。检测项目适用于以下场景: 1. 肝胆系统疾病的筛查与鉴别诊断; 2. 酒精性肝损伤的辅助判断; 3. 药物肝毒性监测; 4. 健康体检中肝功能评估。 检测结果以U/L(单位/升)表示,参考范围因年龄、性别和实验室方法而异,通常成年男性为10-60 U/L,女性为7-45 U/L。
使用GPNA底物法的γ-GT检测需依赖以下仪器设备: 1. 全自动生化分析仪:如日立(Hitachi)、罗氏(Roche Cobas)或贝克曼(Beckman AU)系列,用于实现试剂与样本的精准混合、孵育及吸光度测定; 2. 分光光度计:需具备405 nm波长检测能力,用于监测硝基苯胺的生成速率; 3. 恒温水浴箱或温控系统:确保反应温度稳定在37±0.5℃; 4. 微量加样器与校准设备:保证样本和试剂的加样精度。
GPNA底物法基于酶促反应动力学原理:γ-GT催化底物L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(GPNA)的γ-谷氨酰基转移,生成黄色的5-氨基-2-硝基苯甲酸酯,其生成速率与酶活性成正比。具体步骤如下: 1. 样本预处理:采集静脉血后离心分离血清/血浆,避免溶血; 2. 试剂配制:按说明书复溶试剂,含有缓冲液、GPNA底物及甘氨酰甘氨酸(受体); 3. 反应体系建立:样本与试剂按比例混合,37℃孵育; 4. 吸光度监测:在405 nm波长下,动态测定每分钟吸光度变化(ΔA/min); 5. 结果计算:根据公式γ-GT活性(U/L)= ΔA/min × 校正系数(含摩尔消光系数和光径校准)。
γ-GT检测需符合以下标准要求: 1. 国内标准:遵循《WS/T 404.7-2015 临床化学检验基本技术标准》和《YY/T 1257-2015 γ-谷氨酰基转移酶测定试剂盒(GPNA底物法)》; 2. 国际指南:参考CLSI(临床和实验室标准协会)EP系列文件,如EP05-A3(精密度验证)和EP06-A(线性范围评估); 3. 性能验证指标:包括线性范围(通常5-1000 U/L)、精密度(批内CV≤5%,批间CV≤8%)、准确度(回收率90-110%); 4. 质控措施:每日使用两个浓度质控品(正常值与病理值),参与室间质评计划(如国家临检中心EQA)。
1. 避免使用溶血、脂血或黄疸样本,以免干扰吸光度检测; 2. 试剂开封后需按说明书保存,避免反复冻融; 3. 部分药物(如苯妥英、巴比妥类)可能诱导γ-GT活性升高; 4. 需定期校准仪器光路和加样系统,确保检测准确性。
GPNA底物法作为γ-GT检测的标准化方法,结合自动化分析技术,可快速、精准地评估肝功能状态。实验室需严格遵循检测标准,规范操作流程,并通过持续的质量控制保障结果可靠性,为临床诊疗提供有力支持。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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