植物多倍体检测需围绕 染色体计数、流式细胞术、形态学观察 及 分子标记分析 等核心方法展开，结合国际标准（如流式细胞术的Galbraith法）及农业行业规范，适用于作物育种、种质资源鉴定和进化生物学研究。以下是系统化的检测方案与操作指南：

一、核心检测方法对比

二、染色体计数法（金标准）

1. 实验步骤

1. 材料预处理：
   • 取根尖（1~2cm）或幼叶分生组织，浸泡于0.002M 8-羟基喹啉（4℃, 3h）以阻滞中期分裂。
2. 固定与解离：
   • 卡诺固定液（乙醇:冰醋酸=3:1）固定24h。
   • 60℃下1N HCl解离8~10分钟（或酶解法：2%纤维素酶+1%果胶酶，37℃, 30min）。
3. 染色与制片：
   • 卡宝品红染色15min，压片后显微镜观察（×1000油镜）。

2. 结果判定

• 二倍体：染色体数目=2n（如水稻2n=24）。
• 四倍体：2n=4x（如四倍体西瓜2n=44）。
• 注意事项：
  • 至少统计30个中期细胞，确保≥85%细胞染色体数目一致。
  • 避免过度解离导致染色体碎裂。

三、流式细胞术（高效批量检测）

1. 实验流程

1. 样本制备：
   • 取0.5cm²叶片，加入1mL Galbraith缓冲液（45mM MgCl₂, 30mM柠檬酸钠, 20mM MOPS, 0.1% Triton X-100, pH7.0），冰浴研磨。
2. 染色：
   • 过滤后加入50μg/mL碘化丙啶（PI）或DAPI，避光孵育30min。
3. 上机检测：
   • 使用BD Accuri C6等流式细胞仪，激发波长488nm（PI）或355nm（DAPI）。

2. 数据分析

• 倍性判定：
  • 二倍体峰（2C）与四倍体峰（4C）的荧光强度比应为1:2。
  • 内标法：加入已知倍性标准品（如鸡红细胞，2.5pg DNA/细胞）校准。

四、形态学与生理指标辅助鉴定

五、分子标记法（SSR/SNP分析）

1. 实验步骤

1. DNA提取：CTAB法提取植物基因组DNA。
2. 引物设计：选择多态性SSR标记（如水稻RM1、RM5）。
3. PCR扩增：
   • 反应体系：10μL（含1U Taq酶，0.2mM dNTP，0.5μM引物）。
   • 程序：94℃ 5min → 35 cycles（94℃ 30s, 55℃ 30s, 72℃ 30s）→ 72℃ 5min。
4. 电泳分析：
   • 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（8%），银染显色。

2. 结果解读

• 二倍体：每个位点最多2条带（二体遗传）。
• 四倍体：可能出现3~4条带（同源四倍体）或2条带但剂量差异（异源四倍体）。

六、注意事项与常见问题

七、应用场景

1. 作物育种：
   • 通过秋水仙素诱导多倍体，检测四倍体西瓜（2n=44）以提高果实大小与抗逆性。
2. 种质资源鉴定：
   • 区分天然多倍体（如六倍体普通小麦）与杂交后代。
3. 生态进化研究：
   • 分析多倍体化对植物适应性（如四倍体铁线莲的耐寒性提升）。

通过系统化检测，可精准鉴定植物倍性，为遗传改良和基础研究提供关键数据。建议根据实验条件选择方法：

• 快速筛查：流式细胞术（1小时/批）。
• 精准验证：染色体计数法（需经验）。
• 野外调查：形态学+气孔特征辅助判断。
• 分子机制研究：SSR/SNP标记结合基因组测序。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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