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紫杉醇成分含量检测

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发布时间：2025-03-13 11:26:39 更新时间：2025-06-09 16:42:38

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

紫杉醇是一种从红豆杉属植物（如 太平洋红豆杉、曼地亚红豆杉）或通过 半合成工艺 提取的抗癌药物，其含量检测需围绕 灵敏度、选择性及稳定性 展开，确保药品质量符合 《中国药典》、USP（美国药典） 及 ICH Q2(R1) 标准。以下是基于 HPLC、LC-MS/MS 及 UPLC 的系统化检测方案：

一、核心检测方法对比

方法	优势	局限性	适用场景
HPLC-UV	设备普及、成本低、操作简单	灵敏度较低（μg/mL级）、易受干扰	原料药纯度检测（含量≥98%）
UPLC-PDA	高分离度、快速分析（5min/样）	需超高效色谱柱（亚2μm粒径）	复杂基质（植物提取物）分离
LC-MS/MS	超高灵敏度（ng/mL级）、抗干扰性强	设备昂贵、维护复杂	生物样本（血浆、组织）微量检测
HPTLC（薄层色谱）	快速筛查、低成本	定量精度低（RSD≥5%）	初筛或半定量分析

二、标准化检测流程（以HPLC-UV为例）

1. 样品前处理

植物组织（树皮/枝叶）：
1. 干燥粉碎 → 甲醇超声提取（30min，50℃）→ 离心（10,000rpm×10min）→ 0.22μm滤膜过滤；
2. 固相萃取（SPE C18柱）净化，洗脱液：甲醇-水（70:30, v/v）。
药品制剂：
1. 精密称取样品 → 乙腈溶解 → 稀释至线性范围（10~100μg/mL）。

2. HPLC条件优化

参数	推荐设置	作用
色谱柱	Agilent ZORBAX SB-C18（4.6×250mm, 5μm）	高载量、耐酸碱
流动相	乙腈-水（45:55, v/v）	优化保留时间（紫杉醇≈15min）
流速	1.0 mL/min	平衡柱压（≤3000 psi）
检测波长	227 nm	紫杉醇最大吸收峰
柱温	30℃	提高分离重现性

3. 定量分析

外标法：
1. 紫杉醇对照品配制梯度浓度（5、10、20、50、100μg/mL）；
2. 绘制标准曲线（R²≥0.999），计算样品浓度。
内标法（LC-MS/MS适用）：使用 氘代紫杉醇（D5-Paclitaxel） 作为内标，校正基质效应。

三、方法学验证（ICH Q2(R1)）

参数	要求	验证结果示例
线性范围	R²≥0.999，覆盖50%~150%目标浓度	5~100μg/mL（HPLC-UV）
精密度（RSD）	重复性≤2%，中间精密度≤3%	日内RSD=1.5%，日间RSD=2.8%
准确度（回收率）	加标回收率98%~102%	低（10μg/mL）：99.2%，高（80μg/mL）：101.5%
检测限（LOD）	S/N≥3	HPLC-UV：0.5μg/mL；LC-MS/MS：0.1ng/mL
定量限（LOQ）	S/N≥10	HPLC-UV：1.5μg/mL；LC-MS/MS：0.3ng/mL
专属性	主峰与杂质分离度≥1.5	紫杉醇峰与10-去乙酰基紫杉醇分离度=2.3

四、常见问题与解决方案

问题现象	可能原因	改进措施
峰拖尾或分叉	色谱柱污染或流动相pH不适	冲洗色谱柱（乙腈:水=90:10），调节流动相pH至3.0（乙酸调节）
保留时间漂移	柱温波动或流动相比例变化	使用柱温箱（±0.5℃精度），在线脱气机更新流动相
灵敏度不足	检测波长偏移或灯能量衰减	校准紫外检测器波长，更换氘灯
基质干扰严重	植物提取物中多酚/萜类干扰	优化SPE净化步骤（C18柱+甲醇-水梯度洗脱）

五、应用场景与参考标准

原料药质量控制：
- 药典标准：中国药典2020版规定紫杉醇原料药含量≥98.0%（HPLC法）；
- 杂质控制：相关物质（如10-去乙酰基紫杉醇）≤0.5%。
植物提取工艺优化：
- 检测不同部位（树皮、枝叶）的紫杉醇含量，筛选高产株系；
- 优化提取溶剂（甲醇 vs 乙醇）、温度、时间。
生物样本药代动力学：
- LC-MS/MS法测定血浆中紫杉醇浓度，计算AUC、C<sub>max</sub>等参数。