细胞毒性试验用于评估材料、化合物或医疗器械对细胞存活、增殖及功能的影响，是生物相容性评价（如ISO 10993-5）和药物安全性筛选的核心环节。以下是针对 体外细胞毒性测试 的系统化方案，涵盖方法选择、实验设计及结果分析。

一、核心检测方法与标准

二、实验设计与关键步骤

1. 细胞选择与培养

• 常用细胞系：
  • L929小鼠成纤维细胞（ISO推荐）、HepG2（肝毒性）、HaCaT（皮肤毒性）。
• 培养条件：
  • DMEM/RPMI-1640 + 10% FBS，37℃、5% CO₂，传代至对数生长期。

2. 样品处理与暴露

• 直接接触法：
  • 材料切割为5×5mm薄片，灭菌后与细胞共培养24~72h（ISO 10993-5）。
• 浸提液法：
  • 材料按表面积浸提（0.1g/mL，37℃×24h），浸提液稀释梯度（100%、50%、25%）加入细胞。

3. MTT法操作流程

1. 细胞接种：
   • 96孔板，每孔5×10³细胞，孵育24h贴壁。
2. 样品暴露：
   • 加入待测样品（浸提液或化合物），设阴性对照（培养基）、阳性对照（0.1%苯酚）。
3. MTT孵育：
   • 暴露24/48h后，每孔加MTT（5mg/mL，10μL），孵育4h。
4. 溶解与检测：
   • 吸弃培养基，加DMSO 100μL溶解甲臜，酶标仪测570nm吸光度（参考波长630nm）。
5. 计算细胞存活率： 存活率=A样品−A空白A阴性对照−A空白×100%存活率=A阴性对照​−A空白​A样品​−A空白​​×100%

4. 结果判定（ISO 10993-5）

三、关键设备与试剂

四、常见问题与解决方案

五、国际标准对比

六、应用场景与报告要求

1. 医疗器械：
   • 植入材料（如钛合金、聚合物）需通过ISO 10993-5测试，提交细胞毒性报告至FDA或CE认证。
2. 药物开发：
   • 新药筛选时计算IC50值（半数抑制浓度），评估治疗指数（TI）。
3. 化妆品安全：
   • 欧盟EC 1223/2009要求化妆品原料通过体外细胞毒性测试（如皮肤刺激替代试验）。

检测报告内容：

• 样品信息、试验方法（MTT/LDH等）、细胞系、暴露条件、存活率数据、毒性等级结论、标准符合性声明。

通过系统化试验设计，可精准评估材料的细胞毒性风险。建议结合 3D细胞模型（如类器官）和 高通量筛选技术 提升预测准确性，并严格遵循GLP规范确保数据可靠性。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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