氧自由基吸收能力（Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC）检测是评价样品抗氧化活性的核心方法，广泛应用于食品、保健品、化妆品及药物研发。该检测通过模拟生物体内自由基链式反应，量化样品清除过氧自由基（ROO·）的能力，需遵循 AOAC 2012.10（食品抗氧化活性标准）及 USDA方法（美国农业部指南）。以下是检测流程、方法优化及数据解析的详细说明。

一、检测原理与核心参数

1. 基本原理

• 自由基生成：偶氮类化合物（如AAPH）在37℃分解产生过氧自由基（ROO·）。
• 荧光探针：荧光素（Fluorescein）与自由基反应后荧光强度衰减，抗氧化剂延缓衰减速率。
• 定量计算：通过荧光衰减曲线下面积（AUC）计算样品的抗氧化能力。

2. 核心公式

ORAC值=(AUC样品−AUC空白)(AUCTrolox−AUC空白)×Trolox浓度样品浓度ORAC值=(AUCTrolox​−AUC空白​)(AUC样品​−AUC空白​)​×样品浓度Trolox浓度​

• 单位：μmol Trolox当量（TE）/g 或 /mL。
• Trolox：水溶性维生素E类似物，作为标准参照物。

二、检测流程与操作要点

1. 试剂与仪器

2. 操作步骤

1. 样品前处理：
   • 液体样品：离心（10,000×g，10分钟）去除颗粒物。
   • 固体样品：研磨后以甲醇/水（70:30）超声提取30分钟，过滤备用。
2. 反应体系构建（96孔板，每孔200 μL）：

   组分	体积（μL）	终浓度
   荧光素溶液	150	70 nM
   样品/Trolox标准液	25	依稀释梯度调整（如10 μg/mL）
   AAPH溶液	25	12 mM（临用前配制）

3. 荧光监测：
   • 37℃恒温，每2分钟读取一次荧光值，持续1-2小时（至荧光衰减至初始值1%）。

3. 数据分析

• 计算AUC： AUC=0.5×(f1+f2)×Δt+0.5×(f2+f3)×Δt+⋯AUC=0.5×(f1​+f2​)×Δt+0.5×(f2​+f3​)×Δt+⋯
  • fnfn​: 第n次荧光强度；ΔtΔt: 时间间隔（2分钟）。
• 绘制标准曲线：以Trolox浓度为横坐标，ORAC值为纵坐标，拟合线性方程（R²≥0.99）。

三、常见问题与优化策略

四、行业应用与标准参考

1. 应用场景

2. 参考标准

• USDA方法：适用于食品抗氧化活性检测（公开协议，2007年修订）。
• AOAC 2012.10：官方验证方法，用于果汁、固体食品的ORAC测定。
• ISO 10930:2012：饲料中抗氧化活性的ORAC法评估。

五、技术创新与趋势

1. 高通量检测：
   • 自动化液体处理工作站（如Tecan Freedom EVO）实现384孔板检测。
2. 探针改良：
   • 新型荧光探针（如BODIPY）提升抗光漂白能力，延长检测窗口。
3. 联用技术：
   • ORAC与细胞抗氧化活性（CAA）结合，评估生物利用度。
4. 便携式设备：
   • 微型荧光检测仪（如手持式分光光度计）用于现场快速筛查。

总结

ORAC检测通过量化样品清除过氧自由基的能力，为抗氧化性能提供客观评价。需严格遵循标准流程（AAPH浓度、荧光探针稳定性、温控），优化样品前处理以降低干扰。数据解析时，应确保标准曲线线性及重复性，结合应用场景（如食品保鲜、抗衰产品）解读结果。未来趋势包括高通量自动化、新型探针开发及多模型联用技术，推动抗氧化研究向精准化、实用化发展。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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