细菌总数（Total Viable Count, TVC）是评估样品卫生质量的重要指标，广泛应用于食品、饮用水、化妆品、医疗用品及环境监测等领域。以下是细菌总数检测的关键步骤、方法标准及常见问题解决方案。

一、检测原理与适用范围

1. 原理

   • 培养法：样品经适当稀释后，在特定培养基（如平板计数琼脂，PCA）中培养，统计菌落形成单位（CFU）。
   • 快速法：ATP生物发光法、流式细胞术等（适用于快速筛查）。

2. 适用样品

   • 食品：GB 4789.2-2022；
   • 饮用水：GB 5750.12-2023；
   • 化妆品：GB 7917.1-2023；
   • 医疗器械：ISO 11737-1。

二、检测流程（以食品为例）

1. 样品采集与预处理

• 无菌操作：采样工具（镊子、吸管）需121℃高压灭菌20分钟。
• 样品均质：
  • 固体样品：25g样品 + 225mL无菌生理盐水（0.85% NaCl），均质2分钟（拍击式均质器）。
  • 液体样品：直接吸取原液或稀释。

2. 梯度稀释

• 稀释液选择：磷酸盐缓冲液（PBS）或0.1%蛋白胨水。
• 稀释步骤：依次做10⁻¹、10⁻²、10⁻³等稀释度（每步更换无菌吸管）。

3. 倾注培养

• 培养基：平板计数琼脂（PCA，适用需氧菌，30-35℃）；
  • 选择性培养基：如化妆品检测用TSA+卵磷脂吐温80（GB 7917.1）。
• 操作：
  • 取1mL稀释液注入无菌平皿 → 加入15-20mL冷却至45℃的PCA → 旋摇混匀 → 凝固后倒置培养。

4. 培养条件

• 温度与时间：
  • 食品/环境样品：36±1℃，48±2小时；
  • 化妆品：30-35℃，72小时（含防腐剂样品需中和处理）。
• 培养设备：恒温培养箱（精度±0.5℃）。

5. 菌落计数

• 计数规则：
  • 选择30-300 CFU的平板；
  • 同一稀释度至少2个平板，取平均值；
  • 低于30 CFU记录实际值，高于300 CFU记为“多不可计”。
• 计算公式： TVC(CFU/g或mL)=∑菌落数稀释倍数×接种体积TVC(CFU/g或mL)=稀释倍数×接种体积∑菌落数​

三、关键仪器与试剂

四、结果判读与标准限值

1. 限值要求（示例）

   • 包装饮用水：≤50 CFU/mL（GB 19298）；
   • 婴儿食品：≤10⁴ CFU/g（GB 10765）；
   • 化妆品：≤500 CFU/g（GB 7916）。

2. 结果报告

   • 低于检测限：报告为“＜1 CFU/g（最低稀释度）”；
   • 多个稀释度均无生长：报告最低稀释度结果；
   • 菌落蔓延：标注“蔓延菌落”，重新检测。

五、常见问题与解决方案

六、质量控制措施

1. 空白对照：每批次检测带1-2个空白平板（仅加稀释液）。
2. 平行样检测：同一稀释度至少2个平板，偏差≤15%。
3. 阳性对照：使用标准菌株（如E. coli ATCC 25922）验证培养基适用性。
4. 设备校准：培养箱温度计每年校准，移液器每月校准。

七、快速检测方法对比

八、标准依据与文件

• 国家标准：GB 4789.2-2022《食品微生物学检验 菌落总数测定》
• 国际标准：ISO 4833-1:2013《食品和动物饲料微生物学 菌落计数》
• 行业规范：SN/T 0168-2019《进出口食品中菌落总数测定方法》

总结

细菌总数检测需严格遵循无菌操作与标准流程，重点关注以下环节：

• 样品代表性：均质充分，避免局部污染；
• 稀释准确性：梯度合理，防止过高或过低；
• 培养条件：温度均匀，避免冷凝水干扰；
• 结果判读：排除蔓延菌落，规范记录。

建议企业建立内部质控体系，定期参与能力验证（如CNAS PT-Z-09项目），并针对不同样品特性（如高脂、高糖、含防腐剂）优化前处理方法，确保检测结果真实可靠。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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