总黄酮（Total Flavonoids）是植物源性食品、药品及保健品中的重要活性成分，其检测需围绕 提取效率、显色反应稳定性、干扰消除及定量准确性 等核心环节展开，确保符合 《中国药典》2020年版、GB/T 22244-2008（保健食品中总黄酮的测定）及AOAC 999.08（植物提取物总黄酮测定）等标准。以下是总黄酮检测的标准化流程与技术要点：

一、核心检测方法与标准选择

二、硝酸铝-亚硝酸钠比色法操作流程

1. 试剂配制

• 5%亚硝酸钠（NaNO₂）：5g NaNO₂溶解于100mL蒸馏水；
• 10%硝酸铝（Al(NO₃)₃）：10g Al(NO₃)₃·9H₂O溶解于100mL蒸馏水；
• 4%氢氧化钠（NaOH）：4g NaOH溶解于100mL蒸馏水；
• 芦丁标准溶液：精确称取芦丁标准品10mg→甲醇溶解定容至100mL（0.1mg/mL）。

2. 样品前处理

• 固体样品：粉碎过40目筛→称取1.0g→加入70%乙醇50mL→超声提取30min（60℃）→离心（4000rpm×10min）→上清液定容至50mL；
• 液体样品：直接稀释或离心去除悬浮物。

3. 显色反应

1. 取1mL样品液→加5% NaNO₂ 0.3mL→静置6min；
2. 加10% Al(NO₃)₃ 0.3mL→静置6min；
3. 加4% NaOH 4mL→补蒸馏水至10mL→静置15min；
4. 空白管以蒸馏水替代样品液，同法操作。

4. 吸光度测定

• 仪器：紫外-可见分光光度计（如岛津UV-2600）；
• 波长：510nm，1cm比色皿；
• 计算： 总黄酮含量（mg/g或mg/mL）=(A样品−A空白)×C标准×V总A标准×m样品总黄酮含量（mg/g或mg/mL）=A标准​×m样品​(A样品​−A空白​)×C标准​×V总​​ （C标准C标准​：芦丁浓度，V总V总​：样品总体积，m样品m样品​：样品质量）

三、HPLC法操作流程（以槲皮素为例）

1. 色谱条件

• 色谱柱：C18柱（4.6×250mm，5μm）；
• 流动相：A相（0.1%甲酸水），B相（乙腈）；
• 梯度：0~20min，B相10%→50%；
• 流速：1.0mL/min；
• 检测波长：360nm；
• 柱温：30℃。

2. 样品处理

• 提取同比色法→过0.22μm滤膜→进样10μL。

3. 定量分析

• 以槲皮素为标准品绘制标准曲线（0.1~50μg/mL，R²≥0.999）；
• 外标法计算总黄酮含量（以槲皮素当量计）。

四、检测设备与试剂

五、常见问题与解决方案

六、应用场景检测重点

1. 中药材（如银杏叶、葛根）：

   • 关键指标：总黄酮含量≥24%（银杏叶提取物，GB/T 30675-2023）；
   • 干扰处理：去除鞣质（聚酰胺吸附法）。

2. 保健食品（如蜂胶、葡萄籽）：

   • 合规要求：总黄酮标注值误差≤±10%（GB 16740-2023）；
   • 检测方法：优先选用HPLC法（避免色素干扰）。

3. 功能性食品（如茶饮料）：

   • 快速筛查：紫外分光光度法初测，比色法复核；
   • 稳定性：检测加工过程中黄酮损失率（高温/光照影响）。

总结

总黄酮检测需以 “提取完全、显色稳定、数据可靠” 为核心原则：

• 方法选择：比色法用于常规检测，HPLC法用于高精度分析；
• 技术创新：在线衍生化技术、超高效液相色谱（UHPLC）；
• 应用价值：保障产品质量、支持功能声称、满足法规合规。

实施建议：

1. 根据样品基质选择方法（复杂基质优先HPLC）；
2. 定期验证方法准确性（加标回收率85%~115%）；
3. 通过 CNAS/CMA认证实验室 出具报告；
4. 建立 黄酮成分数据库，优化工艺参数（提取温度/溶剂比例）。

通过科学检测与工艺优化，可精准量化植物资源中的黄酮价值，为食品、药品及保健品研发提供关键数据支撑。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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