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人源间充质细胞检测

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发布时间：2025-04-21 09:29:18 更新时间：2025-06-09 17:26:43

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

人源间充质细胞检测的重要性和背景介绍

人源间充质干细胞（Human Mesenchymal Stem Cells, hMSCs）作为再生医学和细胞治疗的核心资源，其质量检测直接关系到临床应用的安全性与有效性。随着干细胞疗法在骨关节修复、免疫调节、心血管疾病等领域的广泛应用，国际监管机构对hMSCs的质量标准提出了严格要求。检测的核心目标在于确保细胞的纯度、活性、分化潜能及无致瘤性，同时排除微生物污染和遗传稳定性风险。当前，针对hMSCs的检测不仅是药物研发的必要环节，更是临床转化前必须通过的合规性门槛，涉及从基础研究到产业化生产的全生命周期质量监控。

检测项目与范围

人源间充质细胞检测涵盖以下关键项目： 1. 表面标记物鉴定：通过CD73、CD90、CD105阳性表达及CD34、CD45、HLA-DR阴性表达确认细胞身份； 2. 分化能力验证：评估其向成骨、成脂、成软骨分化的潜能； 3. 细胞活率与增殖活性：采用台盼蓝染色和CCK-8法检测； 4. 微生物安全性：包括细菌、真菌、支原体及内毒素检测； 5. 遗传稳定性分析：核型分析及端粒酶活性检测； 6. 致瘤性评估：通过软琼脂克隆形成试验和动物模型验证。

检测仪器与设备

检测过程依赖以下专业化设备： • 流式细胞仪：用于表面标记物定量分析（如BD FACSCanto II）； • 实时定量PCR仪：检测分化相关基因（如Runx2、PPARγ）； • 倒置荧光显微镜：观察细胞形态及分化染色结果（如油红O、茜素红染色）； • 微生物检测系统：包括BACTEC FX40血培养仪和PCR支原体检测试剂盒； • 全自动生化分析仪：用于内毒素定量（基于鲎试剂法）； • 生物安全柜及CO2培养箱：确保无菌操作环境。

标准检测方法与流程

检测流程严格遵循ISO 13085:2018及《中国药典》指导原则： 1. 样本制备：取第3-5代对数生长期细胞，密度控制为1×10⁶ cells/mL； 2. 流式检测：使用FITC/PE标记抗体，设置同型对照，采集≥10,000个细胞事件； 3. 分化诱导：成骨诱导21天（含β-甘油磷酸钠、地塞米松），成脂诱导14天（含胰岛素、IBMX）； 4. 微生物检测：采用膜过滤法结合培养法，14天无菌观察期； 5. 数据分析：流式结果要求阳性标记≥95%，阴性标记≤2%，分化染色需通过双盲法评分。

技术标准与规范

检测依据以下核心标准： • 国际细胞治疗学会（ISCT）：hMSCs最低鉴定标准（2006年修订版）； • ISO 13085:2018：干细胞培养与检测通用要求； • 中国药典（2020版）：生物制品无菌检查法及支原体检测法； • FDA指南CPG Sec. 400.210：细胞治疗产品放行标准； • EMA/CHMP/BWP/271475/2006：干细胞制剂的致瘤性评估要求。

检测结果评判标准

合格细胞需满足以下阈值： 1. 表面标记物：阳性标记（CD73/CD90/CD105）占比≥95%，阴性标记（CD34/CD45/HLA-DR）占比≤2%； 2. 细胞活率≥90%，倍增时间≤48小时； 3. 分化能力：成骨诱导后钙结节≥5个/视野（40×），成脂诱导脂滴占比≥30%； 4. 微生物检测：需氧菌/厌氧菌/真菌培养14天无生长，内毒素≤0.5 EU/mL； 5. 遗传稳定性：核型分析显示正常二倍体，端粒酶活性阴性； 6. 致瘤性测试：软琼脂克隆形成率≤0.1%，裸鼠移植6个月无瘤灶形成。