亲和膜色谱介质分离真实料液中单抗检测的重要性与背景
单克隆抗体（单抗）作为生物制药领域的重要产品，在肿瘤治疗、自身免疫性疾病等领域具有广泛应用。在单抗生产过程中，从复杂的真实料液（如细胞培养上清）中高效分离纯化目的抗体是关键的工艺环节。亲和膜色谱技术因其高选择性、高通量和操作简便等特点，已成为单抗分离纯化的主流技术之一。对亲和膜色谱介质分离效果的准确检测，直接关系到单抗产品的纯度、收率和生产成本，是生物制药工艺开发和质控的重要环节。该检测技术可应用于生物制药企业的工艺开发、生产监控以及相关研究机构的分离材料性能评价，对于优化分离工艺、提高产品质量具有重要作用。
检测项目和范围
本检测主要包含以下项目：1）亲和膜色谱介质对抗体的动态结合容量测定；2）料液中单抗的纯度分析；3）分离过程中杂蛋白的去除率；4）抗体回收率测定；5）膜色谱介质的重复使用稳定性评估。检测范围涵盖各种商品化或自制的亲和膜色谱介质（如Protein A、Protein G或仿生配基修饰的膜介质），适用于CHO细胞、杂交瘤细胞等不同表达系统产生的单抗料液。
使用的检测仪器和设备
检测过程需要使用以下主要仪器设备：1）高效液相色谱系统（HPLC，配备紫外检测器）；2）AKTA纯化系统或类似的中试规模层析系统；3）紫外-可见分光光度计；4）SDS-PAGE电泳系统；5）酶标仪（用于BCA等蛋白定量检测）；6）pH计和电导率仪；7）恒流泵和在线UV监测系统；8）0.22μm无菌滤膜和过滤装置；9）电子天平（精确至0.1mg）。其中HPLC系统建议配置适合单抗分析的色谱柱（如尺寸排阻色谱柱SEC或反相色谱柱）。
标准检测方法和流程
标准检测流程包括以下步骤：1）样品预处理：将真实料液离心（10,000×g，15min）后过0.22μm滤膜去除颗粒物；2）系统平衡：用平衡缓冲液（如20mM PBS，pH7.4）平衡亲和膜色谱柱至基线稳定；3）上样吸附：以优化流速上样处理后的料液，记录穿透曲线；4）淋洗：用平衡缓冲液洗除非特异性吸附的杂蛋白；5）洗脱：采用梯度或阶梯洗脱（如pH3.0甘氨酸缓冲液）收集抗体峰；6）在线监测280nm处紫外吸收；7）收集样品后立即用中和缓冲液调节pH；8）对洗脱峰进行纯度、浓度和活性分析。整个过程中需记录流速、压力、温度等关键参数。
相关的技术标准和规范
本检测遵循的主要技术标准包括：1）《中华人民共和国药典》（2020年版）中关于生物制品纯度和含量测定的相关规定；2）ICH Q6B对生物技术产品纯度检测的要求；3）ISO 13485医疗器械质量管理体系标准；4）美国药典USP<1046>关于生物层析系统验证的指南；5）ASTM E2963-15关于色谱介质性能评价的标准方法；6）行业通用的Good Laboratory Practice（GLP）规范。对于治疗用单抗产品，还需符合FDA和EMA关于工艺相关杂质去除的监管要求。
检测结果的评判标准
检测结果的评判主要基于以下指标：1）动态结合容量（DBC）应≥20mg单抗/mL介质（在10%穿透时）；2）单抗纯度：经SDS-PAGE和HPLC-SEC分析，主峰纯度应≥95%；3）宿主细胞蛋白（HCP）残留：<100ppm；4）抗体回收率：≥85%；5）Protein A配基脱落：<10ng/mg抗体；6）介质重复使用稳定性：经10次循环后DBC下降应<15%。对于特定治疗用途的单抗，可能还需满足额外的内毒素（<5EU/mg）和DNA残留（<10ng/dose）标准。所有检测数据需进行统计学处理，RSD应控制在5%以内。
CMA认证
检验检测机构资质认定证书
证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS认可
实验室认可证书
证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO认证
质量管理体系认证证书
证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
扫一扫，更多精彩