肥胖小鼠模型检测：体重体脂、胰岛素抵抗、HE染色与16S测序_【CMA/CNAS认证】

肥胖小鼠模型是代谢综合征、2型糖尿病及脂肪肝研究的常用实验载体，其成模质量与表型鉴定直接决定后续药效评价的可靠性。围绕该模型可建立多维检测体系，覆盖构建鉴定、血清与组织采集、体重体脂与Lee's指数、血糖与胰岛素抵抗、血脂与酶活性、炎症与氧化应激、脂肪病理、肠道菌群及基因蛋白表达模块。以下按流程说明各环节的样品要求、方法选择与结果解读要点，使高脂饮食及药物诱导等多类模型的规范化评价具备可操作路径。

肥胖小鼠模型构建与鉴定方法

模型构建以饮食诱导为主流途径，用高脂饲料或高脂乳剂饲喂C57BL/6等易感品系小鼠，诱导期内定期称重筛选敏感个体。其他途径各有定位：谷氨酸钠用于下丘脑损伤性模型，地塞米松用于少肌性肥胖，饮食限制叠加疲劳应激用于脾胃虚弱型证候模型。鉴定须结合体重、体脂、Lee's指数与糖耐量综合确认。品系敏感性、性别差异及大鼠与小鼠的种属差别均影响成模率，饲喂方案应固定并全程记录。

样本类型与采集——血清与组织

血样于禁食后经眼眶静脉丛或腹主动脉采集，离心分离血清并分装冻存，用于血糖、血脂、胰岛素及炎症因子检测。组织样本覆盖附睾与肾周脂肪、棕色脂肪、肝脏、骨骼肌、股骨及下丘脑，按用途分流：部分以多聚甲醛固定制片，部分经液氮速冻转入超低温保存以备RNA提取与酶活测定。肠道内容物与粪便须无菌采集，干冰转运用于16S测序。禁食时长与取样时点直接影响糖脂指标可比性，须统一记录。

体重、体脂与Lee's指数测定

体重于固定时段每周称量并绘制增长曲线，与正常饲料对照组比对。体脂含量以活体小动物核磁共振或双能X射线法无创测定，获取脂肪与瘦体组织比例；处死后以脂肪垫湿重占体重百分比表征内脏脂肪蓄积。Lee's指数按体重立方根与体长之比计算，体长测自鼻尖至肛门。三项指标联合，可区分全身性肥胖与内脏脂肪优先蓄积表型，并支持性别差异的量化分析。

血糖与胰岛素抵抗检测

空腹血糖以葡萄糖氧化酶法或便携血糖仪测定，采样前统一禁食时点。葡萄糖耐量试验于负荷后按时间点监测血糖并计算曲线下面积；胰岛素耐量试验记录胰岛素注射后的血糖动态降幅。血清胰岛素经ELISA双抗体夹心法测定，与空腹血糖联用计算稳态模型胰岛素抵抗指数。本模块量化糖代谢紊乱程度，也是考察股动脉内皮功能与胰岛素抵抗相关性的基础内容。

血脂与脂代谢酶活性检测

血清甘油三酯、总胆固醇及高低密度脂蛋白胆固醇经酶法以全自动生化分析仪测定。脂代谢酶活性以分光光度法为主：脂蛋白脂酶与肝脂酶经肝素化血浆或组织匀浆测定，激素敏感性脂肪酶以酶促反应速率表征。肝脏匀浆同步测定脂质沉积指标。本模块适用于高脂饲料与高脂乳剂两类诱导方式的表型差别分析，也用于调脂类干预样品的效果评价。

炎症与氧化应激指标联检

慢性低度炎症与氧化应激以血清及组织匀浆联检评估。肿瘤坏死因子α、白细胞介素6及单核细胞趋化蛋白1经ELISA测定；丙二醛以硫代巴比妥酸比色法，超氧化物歧化酶以WST-1法，谷胱甘肽与总抗氧化能力以分光光度法完成。脂肪与肝脏匀浆同步检测可定位损伤的组织来源。该组合适用于氧化应激与炎症递质对骨代谢影响的分析，也是合并症模型全身状态筛查的基础方案。

脂肪组织病理检测——HE染色

脂肪组织病理以苏木精-伊红染色为基础。白色脂肪组织经固定、脱水、石蜡包埋与切片后染色，镜下测量脂肪细胞平均面积与直径，统计大小分布频率，判定细胞肥大程度。巨噬细胞浸润形成的冠状结构与间质炎症细胞密度为观察重点。肝脏切片可评估脂肪变性分级，下丘脑损伤性模型可结合脑区切片核实损毁范围。图像经形态学软件量化，每例取多个不重叠视野求均值以规避取样偏倚。

肠道菌群检测——16S测序

菌群分析以空肠、盲肠内容物或粪便为样品，提取基因组DNA后扩增16S rRNA基因可变区，经高通量测序完成检测。信息分析涵盖操作分类单元聚类、物种注释、α与β多样性及差异物种筛选，可细化至小肠各肠段定植特征。肥胖模型常见菌群多样性下降与门水平比例偏移。本模块用于评价干预前后的菌群调节效应，黄酮类与茶多酚类样品研究应用广泛，亦支持不同饮食习惯与进食节律模型的菌群比较。

基因与蛋白表达检测——qPCR

实时荧光定量PCR是分子表达检测的核心。组织总RNA经提取与完整性鉴定后反转录为cDNA，以SYBR Green法扩增目的基因，内参校正后按2^-ΔΔCt法计算相对表达量。靶基因覆盖脂代谢基因、炎症因子基因、Metrnl等脂肪因子及铁死亡通路分子。蛋白层面以Western blot验证关键分子，血清脂肪因子经ELISA定量。样品避免反复冻融，引物特异性经熔解曲线核实。本模块衔接表型与机制，用于维生素D干预下脂肪组织铁死亡等样品检测。

模型判定标准与应用场景

成模判定以体重增幅超过同期对照组百分之二十为核心界值，辅以Lee's指数增大、内脏脂肪占比升高及糖耐量异常。合并症模型另设加判项，如银屑病皮损评分、少肌性模型的肌力与肌纤维横截面积。应用场景覆盖减重方剂与药对配伍的药效评价、功能性成分菌群调节研究、肥胖与骨质疏松及呼吸系统损害的并发症考察。各检测模块按研究需求组合，用于成模鉴定与干预效果的系统评价。