炭疽芽孢致死小鼠模型是评价抗炭疽药物、疫苗与中和抗体效力的核心实验体系。围绕该模型的检测覆盖三个维度：模型构建质控、感染进程监测与药效终点评价。具体模块含芽孢浓度标定、病原载量qPCR定量、保护性抗原抗体ELISA测定、致死因子含量与活性分析、毒素中和抗体效价测定。系统检测将感染、免疫与治疗过程解析为量化指标，据此评估制剂效价与模型一致性。
检测范围
本模型检测适用于炭疽芽孢杆菌强毒株、弱毒株及突变株制备的芽孢攻击物，后者A16R类弱毒疫苗株与AP431类突变株。检测对象涵盖近交系小鼠与转基因小鼠。样本类型全血、血清、脾脏、肝脏、肺脏等。检测维度覆盖攻毒前芽孢活菌浓度标定、感染后脏器病原载量动态监测、保护性抗原抗体水平测定、致死因子含量与活性分析以及毒素中和效价评价。抗炭疽人源化单抗、无毒突变体重组蛋白、佐剂配方制剂等样品的效力评价均可依托该体系实施。
模型构建——品系与攻毒途径
品系选择需与检测目的匹配。近交系小鼠常用于芽孢致死模型的建立，转基因小鼠适用于致死因子中和抗体的体内筛选。攻毒途径分皮下注射、鼻腔滴注与气溶胶吸入三类：皮下途径剂量控制精确，呼吸道途径更贴近自然感染过程。气溶胶攻毒依托气溶胶发生装置与暴露舱实施，同步监测暴露浓度与粒子粒径分布。攻毒剂量参照预实验确定的致死剂量范围设定。Pasteur Ⅱ株等弱毒株可用于气溶胶感染模型的构建与评价，攻毒后记录存活率、体重变化与临床表现，作为模型成立的宏观判据。
样本类型与采集规范
样本采集遵循感染时序设计。芽孢攻击物于攻毒前取样，用于活菌计数与浓度复核。全血经抗凝处理后直接检测血中菌量，离心分离所得血清用于抗体与中和效价测定。脾、肝、肺等组织于设定时间点剖取，称重后分作两份：一份匀浆用于平板计数与qPCR检测，另一份固定保存用于病理观察。采集全程执行无菌操作，样本编号与攻毒剂量、时间点一一对应。含活菌样本按病原微生物实验规范转运，经灭活处理后方可移出防护环境。
芽孢浓度测定——平板菌落计数法
平板菌落计数法用于攻毒前芽孢悬液活菌浓度的标定。芽孢悬液经梯度稀释后接种平板培养基，适宜温度培养后计数菌落形成单位（CFU），依据稀释度与接种体积换算原液浓度。热处理可灭活繁殖体而保留芽孢活性，据此区分芽孢与残余繁殖体的比例。计数设置平行重复，菌落数须处于可计数区间方可采信。攻毒剂量实际值与理论值的偏差须控制在方案许可范围内。芽孢浓度标定结果直接决定模型致死率的可重复性。
病原载量检测——qPCR定量法
感染后血液与组织中的病原载量采用qPCR定量法动态监测。提取样本基因组DNA后，针对炭疽芽孢杆菌特异的毒力质粒基因（如pagA）设计引物与探针。以系列稀释标准品建立定量曲线，载量以每克组织或每毫升血液的基因拷贝数表述。反应体系设阴性对照与内参对照，用于排除提取抑制与扩增污染的干扰。脏器载量的时序变化反映细菌繁殖与播散规律，亦构成评价抗体制剂清除病原能力的量化指标。培养法与qPCR法联用，可相互印证活菌数与总菌量的差异。
保护性抗原抗体ELISA检测
保护性抗原（PA）是炭疽疫苗的核心免疫原，其抗体水平与免疫保护密切相关。ELISA检测以重组PA蛋白包被固相载体，加入稀释后的待测血清，结合抗体经酶标二抗显色，读取吸光度并对照标准曲线换算抗体浓度。反应板须设阴性、阳性血清对照与复孔，空白孔用于扣除本底。该法适用于灭活疫苗、重组PA疫苗及联合佐剂配方免疫后抗体应答的随访测定。多糖类佐剂（如茯苓多糖组分）与PA联合免疫的配方比较，以该检测作为应答强度的主要读出指标。
致死因子含量与活性检测
致死因子（LF）属锌依赖金属蛋白酶，为炭疽毒素的效应组分，可切割宿主MAPKK家族蛋白。含量检测以重组LF蛋白为参照，采用ELISA或免疫印迹法定量样本中毒素蛋白水平。活性检测基于其对MAPKK底物多肽的切割反应，切割产物经HPLC或荧光底物法测定，反应速率反映酶活性高低。重组制备的LF与无毒突变体须通过含量与活性双重鉴定：突变体蛋白酶活性缺失而免疫原性保留，方可用于抗毒素机理研究与候选疫苗开发。
毒素中和抗体效价测定
中和效价测定评价抗体阻断致死毒素生物活性的能力。体外法将系列稀释的待测血清或单抗与固定量致死毒素混合孵育，随后加入敏感巨噬细胞系培养，以细胞存活率为读数，计算半数保护效价。体内法将抗体与毒素或芽孢预孵育后攻击小鼠，依据存活率变化判定中和效力。转基因小鼠体内筛选体系用于富集全人源中和抗体候选分子。中和效价与ELISA结合抗体水平联合解读，可区分结合性抗体与功能性抗体。
检测性能——灵敏度与重复性
性能验证围绕灵敏度、特异性与重复性展开。培养法检测下限受接种体积限制，qPCR法灵敏度更高，可检出低载量样本。ELISA与中和活性检测的批内、批间重复性以变异系数表征。质控措施标准品随行标定、阳性参照同步检测与人员比对试验。样本基质、采集时点与冻融循环均可引入偏差，须在方案中预先规定控制条件。偏离质控限的数据应予剔除并溯源原因，以保证效力评价结论的稳健性。
应用场景与结果判定标准
该检测体系适用于抗炭疽人源化单抗治疗效力评价、疫苗免疫原性考核、致死因子中和抗体筛选、弱毒株与突变株生物特性比较及佐剂配方优化等场景。结果判定执行多指标联合标准：模型成立以攻毒组出现预期死亡率与特征性病理改变为准；治疗有效以给药组存活率升高、组织载量下降为判据；免疫有效以PA抗体滴度与中和效价同步升高为准。各指标须与阴性、阳性参照组对照解读，据此出具综合评价结论。
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