Traj18基因敲除小鼠模型的构建与表型分析技术规范

摘要

Traj18基因位于小鼠T细胞受体α链（TCRα）可变区，是编码适应性T细胞的重要基因位点。Traj18敲除小鼠模型主要导致TCRα链重排异常，影响iNKT细胞（恒定自然杀伤T细胞）的发育和功能。本文系统阐述了Traj18敲除小鼠模型的检测项目、检测范围、检测标准及相关仪器设备，为该模型的构建和应用提供技术参考。

1 检测项目

1.1 基因水平检测

聚合酶链式反应（PCR）检测
PCR检测是基于DNA水平的基因型鉴定方法。针对Traj18基因敲除位点，设计三引物体系：野生型等位基因引物（WT-F/WT-R）、突变型等位基因引物（Mut-F/Mut-R）和共同反向引物。PCR扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，野生型条带大小约为450bp，突变型条带约为620bp。PCR反应条件：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸40秒，共35个循环；72℃终延伸5分钟。

Southern Blot杂交
采用特异性探针对小鼠基因组DNA进行Southern杂交，验证基因敲除的准确性和完整性。将基因组DNA用限制性内切酶（如EcoRV、HindⅢ）消化，经琼脂糖凝胶电泳分离后转移至尼龙膜，与地高辛标记的探针杂交，通过化学发光法检测目的条带。野生型小鼠显示预期大小的条带，杂合子显示两种条带，纯合敲除小鼠仅显示突变型条带。

实时荧光定量PCR（qPCR）
通过TaqMan探针法对Traj18基因敲除小鼠进行拷贝数分析，验证基因敲除的纯合性。以管家基因（如GAPDH）为内参，通过ΔΔCt法计算Traj18基因的相对拷贝数。纯合敲除小鼠的Traj18基因拷贝数趋近于0，杂合子约为野生型的一半。

1.2 转录水平检测

逆转录PCR（RT-PCR）
提取小鼠胸腺或脾脏总RNA，逆转录合成cDNA，利用特异性引物扩增Traj18基因转录本。野生型小鼠可见特异性条带，纯合敲除小鼠无扩增条带。同时扩增内参基因（如β-actin）作为对照，确保RNA质量和上样量一致。

Northern Blot杂交
提取组织总RNA（20-30μg），经甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分离，转膜后与特异性探针杂交，检测Traj18基因的转录情况。该方法可同时检测转录本的大小和丰度，验证基因敲除对转录产物的影响。

RNA原位杂交
利用地高辛标记的Traj18反义RNA探针，对小鼠胸腺、脾脏组织冰冻切片进行原位杂交，检测Traj18基因在组织细胞中的表达定位。野生型小鼠在胸腺皮质和髓质交界区可见阳性信号，敲除小鼠无特异性杂交信号。

1.3 蛋白水平检测

Western Blot检测
提取胸腺和脾脏组织总蛋白，经SDS-PAGE电泳分离后转移至PVDF膜，利用特异性抗体检测TCRα链蛋白表达。由于Traj18编码TCRα链的特定区域，敲除小鼠可检测到TCRα链的表达改变或缺失。以β-actin为内参进行半定量分析。

流式细胞术
制备小鼠胸腺、脾脏、淋巴结单细胞悬液，采用多色流式细胞术分析iNKT细胞（恒定自然杀伤T细胞）的发育和分布。表面标记包括：CD3、CD4、CD8、TCRβ、NK1.1等。iNKT细胞特异性标记采用PBS57-loaded CD1d四聚体。分析策略包括：

胸腺细胞：分析iNKT细胞发育阶段（阶段0、1、2、3）
脾脏细胞：分析iNKT细胞亚群（NKT1、NKT2、NKT17）
肝脏淋巴细胞：分析iNKT细胞富集情况

免疫组织化学
对胸腺、脾脏、肝脏组织进行冰冻切片或石蜡切片，采用特异性抗体（抗-TCRβ、抗-NK1.1）进行免疫组化染色，观察iNKT细胞在组织中的分布情况。野生型小鼠脾脏边缘区和肝脏血窦可见TCRβ+NK1.1+细胞聚集，敲除小鼠这些区域阳性细胞显著减少或缺失。

酶联免疫吸附试验（ELISA）
收集小鼠血清，检测细胞因子水平（IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-17A）。由于iNKT细胞在受到刺激后能快速产生大量细胞因子，Traj18敲除小鼠在受到α-GalCer刺激后血清细胞因子水平显著低于野生型小鼠。

1.4 细胞功能检测

体外刺激实验
分离脾脏单个核细胞，与特异性糖脂抗原α-Galactosylceramide（α-GalCer）共培养，通过ELISA检测培养上清中细胞因子（IL-4、IFN-γ）的产生情况。Traj18敲除小鼠脾细胞对α-GalCer刺激无反应或反应极低。

细胞增殖实验
采用CFSE标记法检测iNKT细胞的增殖能力。脾细胞与α-GalCer共培养72小时，流式细胞术检测CFSE荧光强度递减情况，分析iNKT细胞的增殖指数。野生型小鼠iNKT细胞出现明显的CFSE稀释峰，敲除小鼠无此现象。

细胞毒性实验
检测肝脏和脾脏iNKT细胞对靶细胞的杀伤活性。以负载α-GalCer的RMA-S细胞为靶细胞，与效应细胞（肝脏单个核细胞）共培养4小时，通过LDH释放法或51Cr释放法检测特异性杀伤率。

1.5 组织病理学检测

常规病理组织染色
对胸腺、脾脏、肝脏、肺脏等组织进行HE染色，观察组织结构变化。重点观察胸腺皮质髓质比例、脾脏白髓结构、肝脏炎性浸润等情况。Traj18敲除小鼠通常无明显自发病理改变，但在疾病诱导模型中可能表现出差异。

免疫荧光染色
采用多重免疫荧光染色技术，对组织切片进行CD3、NK1.1、CD4、CD8等多标记染色，通过共聚焦显微镜观察iNKT细胞的空间分布及其与其他免疫细胞的相互作用。

2 检测范围

2.1 基础免疫学研究

iNKT细胞发育生物学
检测范围涵盖iNKT细胞在胸腺中的发育过程，包括前体细胞向iNKT细胞的分化、阳性选择和阴性选择、功能亚群的分化等。通过分析不同发育阶段的表面标记和转录因子表达，阐明Traj18基因在iNKT细胞谱系确立中的作用。

TCR重排机制研究
检测TCRα链基因重排模式，分析Traj18基因片段在TCRα链重排中的使用频率和偏好性。通过TCR谱系分析技术，研究Traj18缺失对其他TRAV和TRAJ基因片段使用的影响。

免疫调节功能研究
检测iNKT细胞对DC细胞、B细胞、常规T细胞的调节作用，包括共刺激分子表达变化、抗原提呈能力改变、抗体产生调节等方面。

2.2 疾病模型研究

肿瘤免疫学模型
检测范围包括：B16黑色素瘤模型、MC38结肠癌模型、EL4淋巴瘤模型等。观察指标包括肿瘤生长曲线、荷瘤生存期、肿瘤浸润淋巴细胞组成、抗肿瘤免疫应答特征等。

自身免疫性疾病模型
检测范围包括：EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）模型、Ⅰ型糖尿病模型（NOD小鼠）、结肠炎模型（DSS诱导或T细胞转移模型）等。观察疾病发生率、发病时间、临床评分、病理改变、自身抗体产生等指标。

过敏性疾病模型
检测范围包括：OVA诱导的哮喘模型、食物过敏模型等。观察气道高反应性、肺部炎症、血清IgE水平、Th2型细胞因子产生等指标。

感染性疾病模型
检测范围包括：细菌感染（李斯特菌、结核分枝杆菌）、病毒感染（流感病毒、LCMV）、寄生虫感染（疟原虫）等。观察病原体载量、免疫应答特征、组织病理改变、存活率等指标。

代谢性疾病模型
检测范围包括：高脂饮食诱导的肥胖模型、糖尿病模型等。观察体重变化、胰岛素敏感性、糖耐量、脂肪组织炎症、肝脏脂肪变性等指标。

2.3 药物筛选与评价

免疫调节剂筛选
利用Traj18敲除小鼠筛选特异性激活或抑制iNKT细胞的化合物。检测候选化合物刺激后小鼠血清细胞因子水平、免疫细胞活化状态、体内抗肿瘤或抗感染效果。

疫苗佐剂评价
评价以α-GalCer为代表的iNKT细胞激动剂作为疫苗佐剂的效果。检测抗原特异性抗体滴度、T细胞应答强度、记忆性T细胞形成等指标。

免疫治疗药物安全性评价
评估靶向iNKT细胞的免疫治疗药物在Traj18敲除小鼠和野生型小鼠中的毒性差异，揭示可能的on-target毒性机制。

2.4 转化医学研究

人源化小鼠模型构建
将人源iNKT细胞或造血干细胞移植到Traj18敲除小鼠（通常与免疫缺陷背景联合使用），研究人iNKT细胞在体内的发育和功能。

基因治疗研究
利用Traj18敲除小鼠作为基因治疗的模型系统，评估基因修复或替代治疗策略的效果。检测基因治疗后的iNKT细胞重建情况和功能恢复程度。

3 检测标准

3.1 国内标准

实验动物遗传质量控制标准

GB 14923-2022《实验动物遗传质量控制》：规定了基因修饰小鼠的遗传质量检测要求，包括引物设计、PCR检测方法、结果判定标准等。
GB/T 39760-2021《实验动物基因修饰动物模型命名规范》：规定了基因修饰小鼠的命名规则，确保Traj18敲除小鼠的命名符合国际规范。

实验动物微生物学控制标准

GB 14922-2022《实验动物微生物学等级及监测》：规定了SPF级小鼠的微生物学检测项目和合格标准，确保Traj18敲除小鼠在特定病原体-free条件下进行实验。

实验动物病理学评价标准

GB/T 14926系列标准：涉及实验动物病理学检查方法，包括组织取材、固定、包埋、切片、染色等技术规范。

3.2 国际标准

基因修饰动物模型构建指南

The Jackson Laboratory基因型鉴定方案：提供Traj18敲除小鼠的推荐基因型鉴定引物序列和PCR条件。
KOMP（Knockout Mouse Project）标准：规定了基因敲除小鼠载体的构建标准、ES细胞质量控制要求和表型分析基本框架。

免疫表型分析指南

MiGeP（Mouse Immunophenotyping Guidelines）：由国际免疫学联合会（IUIS）发布，规定了小鼠免疫细胞亚群的标记组合和分析策略，包括iNKT细胞的鉴定标准（CD1d四聚体+TCRβ+）。
OPTIMUNE指南：提供了小鼠免疫系统功能检测的标准化方案，包括体外刺激、细胞因子检测等实验条件。

流式细胞术检测标准

ISAC（International Society for Advancement of Cytometry）指南：规定了流式细胞仪校准、荧光补偿设置、数据采集和分析的标准化要求。
MIFlowCyt（Minimum Information about a Flow Cytometry Experiment）标准：要求流式细胞术实验报告包含的关键信息，确保实验结果的可重复性。

3.3 特定检测项目的标准操作程序

基因型鉴定SOP

取材：3周龄小鼠，剪取2-3mm尾尖组织
DNA提取：蛋白酶K消化，酚氯仿抽提或试剂盒提取
PCR体系：2×Taq Master Mix 12.5μL，引物各0.5μM，DNA模板50-100ng，补ddH2O至25μL
PCR程序：94℃ 3min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 40s，35个循环；72℃ 5min；4℃保存
电泳：2%琼脂糖凝胶，120V电泳40分钟，凝胶成像系统观察并记录
结果判定：野生型（+/+）为单一450bp条带；杂合子（+/-）为450bp和620bp双条带；纯合敲除（-/-）为单一620bp条带

iNKT细胞流式检测SOP

单细胞悬液制备：新鲜组织研磨过70μm滤网，红细胞裂解液处理
细胞计数：调整浓度为1×10^7 cells/mL
抗体染色：加入Fc受体阻断剂4℃孵育10分钟，加入荧光标记抗体（CD1d四聚体-PE、CD3-FITC、TCRβ-APC、NK1.1-PerCP）4℃避光孵育30分钟
洗涤：加2mL PBS缓冲液，1200rpm离心5分钟，弃上清
重悬：加入300μL PBS缓冲液，上机检测
设门策略：淋巴细胞门→单细胞门→活细胞门→CD3+细胞→CD1d四聚体+TCRβ+细胞（iNKT细胞）→进一步分析NK1.1、CD4、CD8表达
结果记录：记录iNKT细胞占总淋巴细胞比例、绝对计数和各亚群比例

α-GalCer刺激实验SOP

体内刺激：尾静脉注射α-GalCer（2μg/只），2小时后摘眼球取血，4小时后取脾脏和肝脏
血清细胞因子检测：ELISA法检测IL-4、IFN-γ水平
细胞活化检测：流式细胞术检测脾脏iNKT细胞CD69、CD25表达上调情况
体外刺激：脾细胞（2×10^6 cells/well）与α-GalCer（100ng/mL）共培养48-72小时，收集上清检测细胞因子

4 检测仪器

4.1 分子生物学检测仪器

PCR仪
用于基因型鉴定的DNA扩增。具备精准的温度控制系统（±0.2℃），可编程梯度功能，热盖压力可调。支持快速PCR模式，完成35个循环约需60分钟。配备96孔模块，兼容0.2mL PCR管和96孔板。

实时荧光定量PCR仪
用于Traj18基因拷贝数分析和mRNA表达水平定量。具备5-6个荧光检测通道，支持TaqMan和SYBR Green检测模式。温度均一性±0.1℃，检测灵敏度可达到单拷贝。配备分析软件，支持相对定量和绝对定量分析。

凝胶成像系统
用于PCR产物电泳结果的图像采集和分析。配备高分辨率CCD摄像头（≥500万像素），紫外透射台（302nm）和白光透射台。具备自动曝光、图像增强、条带分子量计算功能。支持多种图像格式输出。

核酸电泳仪
用于琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。电泳仪电源输出电压10-300V，电流4-400mA，定时范围1-999分钟。水平电泳槽可容纳多种尺寸凝胶（7×7cm至15×10cm），配备多种齿数的梳子。

Southern Blot杂交仪
用于DNA水平的基因敲除验证。包括真空转印仪、紫外交联仪、杂交炉和化学发光成像系统。转印仪提供均匀负压，转印效率高；杂交炉温度控制精确（±0.5℃），转速可调。

紫外分光光度计/微量分光光度计
用于核酸浓度和纯度检测。检测波长范围200-800nm，最小样本量1-2μL，浓度检测范围2-5000ng/μL。自动计算A260/A280和A260/A230比值，评估样本纯度。

4.2 细胞水平检测仪器

流式细胞仪
用于免疫细胞亚群分析和功能检测。配备3-5根激光器（405nm、488nm、561nm、640nm等），可同时检测15-20个参数。具备以下核心功能：

多色荧光补偿：自动计算和调节荧光补偿矩阵
高灵敏度检测：可检测弱表达抗原（如细胞因子）
细胞分选功能（选配）：可对特定细胞亚群进行无菌分选
绝对计数功能：结合计数微球进行绝对计数
数据分析软件：支持设门分析、等高线图、三维图等多种显示方式

磁珠分选仪
用于免疫细胞亚群的富集或去除。利用免疫磁珠标记细胞，通过高梯度磁场分离目标细胞。分离纯度可达90-95%，细胞活性>90%。可用于分选iNKT细胞、T细胞、B细胞等。

细胞培养箱
用于细胞体外培养。CO2浓度控制范围0-20%（精度±0.1%），温度控制范围室温+5℃至50℃（精度±0.1℃）。配备HEPA过滤系统，保持箱内洁净度。可选配O2控制模块，实现低氧培养。

超净工作台
用于无菌操作细胞。垂直层流，洁净度ISO 5级（100级）。配备紫外灯消毒系统，工作区宽度≥1200mm，深度≥600mm。可选配真空吸引泵和照明系统。

倒置显微镜
用于观察细胞培养状态。配备相差物镜（4×、10×、20×、40×），目镜10×。具备明场、相差、荧光观察功能。配备数码摄像头，可进行图像采集和测量。

细胞计数仪
用于细胞计数和活力检测。采用台盼蓝染色法，自动识别活细胞和死细胞。计数范围1×10^4-1×10^7 cells/mL，检测时间<30秒。输出细胞总数、活细胞数、存活率、平均直径等信息。

4.3 蛋白水平检测仪器

酶标仪
用于ELISA检测细胞因子浓度。具备多种滤光片（405nm、450nm、492nm、630nm等），可进行单波长和双波长检测。光谱扫描范围340-850nm。配备振荡功能和孵育功能（室温至45℃）。数据分析软件支持四参数拟合、线性回归等多种曲线拟合方式。

Western Blot成像系统
用于化学发光和荧光Western Blot检测。配备高分辨率冷CCD相机（≥600万像素），灵敏度达到飞克级。具备自动曝光功能，动态范围>4个数量级。支持多重荧光检测，适用于双色Western Blot。

蛋白电泳仪
用于SDS-PAGE电泳分离蛋白。电源输出电压10-300V，电流4-200mA。垂直电泳槽可同时1-4块凝胶，凝胶尺寸8.3×7.3cm。配备转印模块，支持湿转和半干转。

组织匀浆机
用于提取组织蛋白和RNA。转速范围5000-30000rpm，可处理多种规格离心管（0.5mL、1.5mL、2.0mL、5mL、15mL、50mL）。配备多种研磨珠，适合不同组织类型。

共聚焦显微镜
用于免疫荧光染色的组织切片观察。配备多根激光器（405nm、488nm、561nm、640nm），可同时采集4-6个通道荧光图像。具备Z轴扫描功能，可进行三维重建。分辨率达XY方向120nm，Z方向200nm。配备活细胞培养系统，可进行长时间动态观察。

4.4 组织病理学检测仪器

石蜡切片机
用于组织石蜡包埋块的切片。切片厚度范围1-60μm，最小步进1μm。具备电动进样和手动模式，样本回缩功能防止切片损伤。配备一次性刀片，保证切片质量。

冰冻切片机
用于新鲜组织的快速切片。箱体温度可降至-35℃，样本头温度可降至-50℃。切片厚度范围1-100μm。配备真空吸附系统，便于收集切片。

自动脱水机
用于组织的自动脱水处理。可设置20个程序步骤，处理标本数量≥100个/批。试剂缸数量≥10个，温度控制范围室温至65℃。具备试剂自动搅拌功能，确保脱水效果均匀。

包埋机
用于组织石蜡包埋。石蜡缸容量≥3L，温度控制范围50-70℃。配备冷台（-5℃），加速石蜡凝固。具备照明系统和放大镜，便于组织定位。

自动染色机
用于组织切片的HE染色和特殊染色。可容纳玻片数量≥30片，程序步骤≥20步。染色时间精确控制，试剂消耗量低。具备通风系统，减少有害气体暴露。

4.5 动物行为学与生理学检测仪器

小动物活体成像系统
用于体内示踪和功能成像。配备高灵敏度CCD相机，制冷温度可达-90℃。具备荧光成像和生物发光成像功能，可进行多光谱分离。配备气体麻醉系统，确保动物在成像过程中保持不动。分析软件支持ROI定量、背景扣除、伪彩处理等功能。

代谢监测系统
用于检测小鼠代谢相关指标。包括活动量、饮水量、进食量、耗氧量、CO2产生量、呼吸商等。可进行长时间连续监测（1-7天）。适用于Traj18敲除小鼠在代谢性疾病模型中的研究。

小动物超声成像系统
用于心血管结构和功能检测。探头频率20-50MHz，分辨率可达30μm。可检测心室结构、射血分数、心输出量等参数。适用于心脏发育和心血管疾病研究。

4.6 辅助设备

超纯水系统
用于制备实验用水。产水电阻率18.2MΩ·cm（25℃），TOC<5ppb。配备紫外灯和终端过滤器，去除细菌和内毒素。产水速度≥1.5L/min。

高速冷冻离心机
用于细胞分离和核酸提取。最高转速≥15000rpm，最大离心力≥20000×g。温度控制范围-10℃至40℃，可快速降温。配备多种转子（角转子、水平转子），适配不同规格离心管。

制冰机
用于制备实验用冰。产冰量≥50kg/天，储冰量≥15kg。雪花状冰，厚度均匀，不易融化。不锈钢外壳，易于清洁。

高压灭菌器
用于实验器材的灭菌处理。容积≥50L，灭菌温度可达135℃。具备多种灭菌程序（液体、固体、废弃物）。配备安全联锁装置，确保操作安全。

-80℃超低温冰箱
用于长期保存样本。温度控制范围-50℃至-86℃，有效容积≥400L。配备温度报警系统，记录温度变化。可选配液氮备用系统，确保断电时温度维持。

5 数据统计与分析规范

5.1 实验设计原则

样本量计算：基于预实验结果或文献数据，采用G*Power软件计算所需样本量。设定检验效能（1-β）为0.8，显著性水平（α）为0.05。一般基因型鉴定需检测所有子代小鼠，表型分析每组至少5-8只小鼠，时间点实验每组至少3-5只/时间点。

随机化和盲法：动物分组采用随机数字表法。实验操作和结果分析采用盲法，操作者不知晓动物基因型。

对照设置：同窝野生型小鼠作为阴性对照；同窝杂合子小鼠作为对照（可选）；已知表型的阳性对照（如其他基因敲除小鼠）。

5.2 统计分析方法

计量资料：正态分布数据采用均数±标准差（Mean±SD）表示，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），两组间比较采用t检验。非正态分布数据采用中位数和四分位数表示，采用非参数检验（Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis检验）。

计数资料：采用卡方检验或Fisher精确检验。

生存分析：采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Log-rank检验比较组间差异。

重复测量数据：采用重复测量方差分析或混合线性模型。

统计软件：SPSS、GraphPad Prism、R语言等。

5.3 结果判读标准

基因敲除验证成功标准：

DNA水平：Southern Blot显示预期条带，无非特异性杂交
RNA水平：RT-PCR无目标条带，Northern Blot无杂交信号
蛋白水平：Western Blot无目标蛋白条带，流式细胞术检测不到iNKT细胞（<0.1%）

表型分析阳性标准：

iNKT细胞缺失：胸腺、脾脏、肝脏中CD1d四聚体+TCRβ+细胞比例<野生型的5%
功能缺失：α-GalCer刺激后血清IL-4和IFN-γ水平<野生型的10%
病理改变：根据具体疾病模型的标准评分系统判定

6 质量控制和注意事项

6.1 质量控制要点

动物质量：

遗传背景：明确记录小鼠品系和遗传背景（通常为C57BL/6J或BALB/c）
微生物等级：SPF级，定期检测哨兵鼠
基因型稳定：每代繁殖均需进行基因型鉴定，确保遗传稳定性
遗传漂变控制：每5-10代回交至背景品系，防止背景基因漂变

试剂质量：

引物：HPLC纯化，工作浓度0.1-1.0μM
抗体：选择已验证的克隆号，进行滴度测试确定最佳使用浓度
四聚体：定期检测荧光强度，避免长期保存导致降解

仪器校准：

PCR仪：定期进行温度校准
流式细胞仪：每日进行QC质控，使用标准微球校准荧光强度
酶标仪：定期进行光路校准和波长准确性验证

6.2 常见问题及解决方案

基因型鉴定失败：

无条带：检查DNA质量，增加模板量，优化退火温度
非特异性条带：提高退火温度，减少循环数，优化引物设计
杂合子鉴定困难：优化电泳条件，使用高浓度琼脂糖凝胶（3-4%）

iNKT细胞检测问题：

背景过高：增加Fc受体阻断，优化抗体浓度，增加洗涤次数
阳性信号弱：检查四聚体活性，使用新鲜样本，优化破膜条件
亚群分析困难：增加荧光通道，优化补偿设置，使用对照抗体

细胞因子检测变异大：

标准曲线线性差：重新配制标准品，检查稀释准确性
样本值低于检测限：浓缩样本，使用高灵敏度试剂盒
批间差异大：使用同一批次试剂盒，标准化操作流程

7 结语

Traj18敲除小鼠模型作为研究iNKT细胞生物学功能的重要工具，其检测体系的规范化和标准化对于保证实验结果的可重复性和可靠性至关重要。本文从检测项目、检测范围、检测标准和检测仪器四个方面系统阐述了该模型的完整检测体系，为研究人员提供了全面的技术参考。随着单细胞测序、空间转录组学等新技术的发展，Traj18敲除小鼠模型的检测方法将不断更新和完善，为深入理解iNKT细胞在免疫调控中的作用机制提供更多技术支撑。