高血压相关的G蛋白偶联受体激酶4转基因小鼠模型

　　多巴胺和肾素-血管紧张素系统是两个最主要的血压调控途径，二者与细胞间第二信使系统协同调节体内水钠平衡，GRK4（G蛋白偶联受体激酶4G-protein-coupled receptor kinase 4, GRK4）则在多巴胺介导的尿钠排泄中发挥重要的作用。GRK4是唯一有4个剪接变异体（GRK4α,β, γ和δ）的GRKs家族成员，编码GRK4的基因定位4p16.3，该位点已被证实与高血压的发生相关。GRK4的突变与肾脏促尿钠排泄功能受损和高血压的发生密切相关，其中R65L（rs2960306）、A142V（rs1024323）和A486V（rs1801058）是现阶段研究频率较高的三个突变。在对中国北方汉族人群的研究中发现，GRK4γ^R65L、GRK4γ^A142V和GRK4γ^A486V的同时存在可使高血压的发生风险较无突变人群高6倍。

　　目前建立的人GRK4γ野生型、GRK4γ^R65L、GRK4γ^A142V和GRK4γ^A486V四种基因转基因小鼠，对其进行血压动态对比分析。结果发现，GRK4γ野生型和GRK4γ^R65L突变转基因小鼠血压正常；GRK4γ^A142V突变转基因小鼠在正常的钠盐摄入情况下即可发生高血压，而GRK4γ^A486V突变转基因小鼠只有在增加钠盐摄入情况下才发生高血压，说明GRK4γ的不同突变会引起不同类型的高血压。

　　用PCR的方法克隆人GRK4γ野生型、GRK4γ^R65L、GRK4γ^A142V和GRK4γ^A486V四种基因的开放阅读框，，均插入系统性表达的启动子下游构建人GRK4γ野生型、GRK4γ^R65L、GRK4γ^A142V和GRK4γ^A486V四种表达载体。用显微注射法将四种转基因载体分别注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，制备四种转基因小鼠。