肝肠胞虫(EHP)检测
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发布时间:2025-05-16 00:52:16 更新时间:2025-05-15 00:52:17
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei, EHP)是一种微孢子虫类病原体,主要感染对虾的肝胰腺组织,导致虾类生长缓慢、饲料转化率下降,严重时可造成大规模经济损失。近年来,随着全球对虾养殖规模的扩大,EHP已成为威胁养殖业的主要病原之一。其潜伏期长、症状隐蔽的特点使得早期检测尤为关键。通过科学、精准的检测手段,能够及时识别感染个体和养殖环境中的病原,从而采取隔离、消毒等措施,有效控制疫病传播。
EHP检测的核心项目包括:病原体核酸检测、感染程度评估、组织病理学分析及环境样本筛查。其中,核酸检测(如PCR)是确诊EHP感染的金标准,可特异性识别EHP的DNA片段;组织病理学切片观察则用于确认肝胰腺细胞的病理损伤;环境样本检测(如水体、底泥、饲料等)有助于追踪感染源,评估生物安全风险。
EHP检测需依赖专业仪器设备以确保结果准确性,主要包括:
1. 实时荧光定量PCR仪(qPCR):用于定量检测EHP的DNA载量,评估感染强度;
2. 普通PCR仪:通过扩增目标基因片段进行定性检测;
3. 显微镜及显微成像系统:观察组织切片中的孢子形态及病理变化;
4. 核酸提取仪与电泳系统:辅助完成样本前处理及产物分析。
目前主流的EHP检测方法包括:
1. 分子生物学检测:采用PCR或qPCR技术,针对EHP的SSU rRNA基因或孢子壁蛋白基因设计特异性引物,通过扩增产物判断感染状态;
2. 组织学检测:将肝胰腺组织制成石蜡切片,经H&E染色或吉姆萨染色后,显微镜下观察孢子及宿主细胞病变;
3. 环介导等温扩增(LAMP):一种快速核酸扩增技术,适用于现场筛查;
4. 免疫学检测:开发中的ELISA或胶体金试纸条可检测特异性抗体或抗原。
EHP检测需遵循国际或国家标准化流程,主要参考:
1. 世界动物卫生组织(OIE)手册:规定PCR检测的引物序列及操作规范;
2. 中国国家标准GB/T 34748-2017:明确对虾微孢子虫检疫技术;
3. 行业标准SC/T 7230-2020:规范EHP的PCR检测方法及结果判定;
4. 实验室质量管理体系:需通过ISO/IEC 17025认证,确保检测过程的可追溯性。
进行EHP检测时需注意:
1. 样本采集应选择患病虾的肝胰腺组织,并避免交叉污染;
2. 分子检测需设置阴性对照和阳性对照,排除假阳/阴性结果;
3. 组织学检测需由经验丰富的病理学家判读;
4. 环境样本检测需结合流行病学调查,综合分析感染途径。
证书编号:241520345370
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