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病毒性脑病和视网膜病（VERV）检测

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发布时间：2025-05-16 01:27:14 更新时间：2025-05-15 01:27:16

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

病毒性脑病和视网膜病（VERV）检测概述

病毒性脑病和视网膜病（Viral Encephalopathy and Retinopathy, VERV）是一种严重危害水产养殖业的高传染性病毒性疾病，主要影响海水鱼类（如石斑鱼、鲈鱼等），其病原体为诺达病毒（Nodavirus）。该病以中枢神经系统损伤为特征，表现为脑组织空泡化、视网膜坏死及行为异常（如螺旋游动），幼鱼死亡率可高达90%以上。由于VERV传播迅速且缺乏特效治疗方法，早期检测和精准诊断成为防控的关键。目前，检测技术主要围绕病毒核酸、抗原及抗体展开，结合分子生物学、免疫学和组织病理学方法，形成多维度检测体系，为疫病监测、种苗检疫和养殖管理提供科学依据。

检测项目

VERV检测的核心项目包括：1）病毒核酸检测（靶向病毒RNA的RT-PCR或实时荧光定量PCR）；2）病毒抗原检测（免疫组化、免疫荧光或ELISA）；3）抗体检测（血清中和试验或间接免疫荧光法）；4）组织病理学检查（脑和视网膜组织的显微观察）；5）病毒分离培养（细胞系接种与病毒扩增）。其中，核酸和抗原检测适用于急性感染期诊断，抗体检测多用于流行病学调查，而组织病理学可提供直观的病变证据。

检测仪器

VERV检测需依赖多种精密仪器：1）实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Roche LightCycler）用于病毒RNA定量分析；2）凝胶成像系统（如Bio-Rad ChemiDoc）辅助电泳结果判读；3）酶标仪（如Thermo Multiskan FC）完成ELISA检测的吸光度测定；4）荧光显微镜（如Olympus BX53）观察免疫荧光标记的病毒抗原；5）超低温冰箱（-80℃）保存样本及病毒核酸；6）生物安全柜确保病毒分离操作的安全性。

检测方法

主流检测方法包括：1）分子生物学检测：采用RT-PCR扩增病毒衣壳蛋白基因（CP基因）的特异性片段，实时荧光定量PCR通过TaqMan探针实现低至10拷贝/μL的灵敏度；2）免疫学检测：利用单克隆抗体通过ELISA检测组织匀浆中的病毒抗原，免疫组化法可定位病毒在脑神经细胞的分布；3）病理学检测：苏木精-伊红（HE）染色观察脑组织空泡化和视网膜层状结构破坏；4）病毒分离：将病鱼组织接种于SSN-1细胞系，观察细胞病变效应（CPE）。

检测标准

VERV检测遵循国际与国内标准化流程：1）国际标准依据OIE《水生动物疾病诊断手册》（2023版）推荐RT-PCR引物序列（如Forward: 5'-CGTGTCAGTGGTTCTGGT-3'）；2）我国《NY/T 2976-2016 鱼类病毒性脑病和视网膜病诊断技术规程》规定采样部位（脑、眼及肾脏）、RNA提取试剂盒（如TRIzol法）及阳性对照设置要求；3）ELISA检测需满足阳性/阴性临界值（Cut-off值）计算标准（通常为阴性均值+3×标准差）；4）实验室需通过ISO/IEC 17025认证，确保检测结果的可追溯性与可比性。