脲酶(脲酶定性、脲酶试验)检测
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发布时间:2025-05-09 18:21:26 更新时间:2025-05-08 18:21:27
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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脲酶(Urease)是一种广泛存在于微生物、植物和动物体内的酶类,能够催化尿素分解为二氧化碳和氨。其在生物代谢、医学诊断、食品安全及农业领域具有重要应用价值。脲酶检测的核心目标是判断样本中是否含有该酶活性(定性分析),或测定其活性水平(定量分析),尤其在食品加工、临床病原菌鉴定及饲料质量控制中具有重要意义。
脲酶检测主要包括以下项目:
1. 脲酶定性检测:通过颜色变化或pH值变化确认样本中是否含有活性脲酶,常用于微生物鉴定(如幽门螺杆菌)和食品中脲酶残留检测。
2. 脲酶活性定量分析:测定单位时间内尿素分解产物的生成量,用于评估酶活性强度,适用于科研和工业酶制剂质量控制。
3. 特异性检测:结合抑制剂或特定底物验证酶反应的特异性,排除非目标酶干扰。
主要检测设备包括:
分光光度计:用于定量检测反应产物(如氨或碳酸盐)的吸光度变化。
pH计/指示剂:通过监测反应体系pH值升高判断脲酶活性。
恒温培养箱:维持反应所需温度条件(通常为37℃)。
微量滴定板阅读仪:适用于高通量样本的快速筛查。
常用检测方法如下:
1. 酚红法(定性):将样本与含尿素和酚红指示剂的溶液混合,脲酶分解尿素产氨导致pH升高,溶液由黄色变为红色。
2. 比色法(定量):使用奈斯勒试剂或苯酚-次氯酸盐法测定氨浓度,通过标准曲线计算酶活性(单位:U/mg蛋白)。
3. 尿素琼脂培养基法:微生物接种后观察培养基颜色变化及产气情况,用于病原菌鉴定。
国内外主要遵循以下标准:
GB 5009.224-2016:《食品中脲酶的测定》规定分光光度法的操作流程及判定限值。
ISO 11816-1:2013:乳制品中脲酶活性的测定标准方法。
CLSI M35-A2:临床微生物实验室中幽门螺杆菌的脲酶快速检测指南。
AOAC 961.09:大豆制品中脲酶活性的定性检测方法。
检测过程中需严格控制反应温度(±0.5℃)、试剂浓度及孵育时间,定期进行标准物质校准以保证结果准确性。检测报告应明确标注方法依据、检测限(LOD)及结果判定标准。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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