脱落酸（Abscisic Acid, ABA）是植物响应逆境（干旱、盐胁迫等）和调控生长发育的关键激素。其检测需围绕 样本前处理、提取纯化、仪器分析、数据验证 等核心环节展开。以下是脱落酸检测的标准化流程与技术要点：

一、样本采集与预处理

1. 样本类型：
   • 植物组织：叶片、根尖、种子（快速冷冻避免ABA降解）；
   • 细胞培养液：离心后取上清液（-80℃保存）。
2. 预处理步骤：
   • 速冻研磨：液氮研磨至粉末状，均匀取样；
   • 灭活酶：加入液氮或沸甲醇终止内源酶活性。

二、ABA提取与纯化

1. 提取溶剂：
   • 甲醇/水混合液（80%甲醇，含1%乙酸），4℃震荡提取2h（GB/T 35874-2018）；
   • 丙酮/水混合液（70%丙酮，pH 2.5）用于脂溶性干扰较多的样本。
2. 纯化方法：
   • 固相萃取（SPE）：C18柱活化→上样→洗脱（甲醇:乙酸=9:1）；
   • 液液萃取：正己烷去脂，乙酸乙酯萃取ABA。

三、检测方法选择与操作

四、LC-MS/MS检测标准化流程（以Agilent 6470为例）

1. 色谱条件：
   • 色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1×100mm, 1.8μm）；
   • 流动相：A相（0.1%甲酸水），B相（乙腈），梯度洗脱（5%→95% B，10min）；
   • 流速：0.3mL/min，柱温40℃。
2. 质谱参数：
   • 离子源：电喷雾电离（ESI），负离子模式；
   • MRM通道：ABA m/z 263→153（定量离子），263→204（定性离子）；
   • 内标：d6-ABA m/z 269→159。
3. 定量计算：
   • 标准曲线：0.1-100ng/mL，R²≥0.99；
   • 回收率：加标回收率80%-120%（样本基质校正）。

五、数据验证与质控

1. 方法验证：
   • 检出限（LOD）：信噪比（S/N）≥3对应的浓度；
   • 定量限（LOQ）：S/N≥10，且精密度RSD≤15%；
   • 特异性：空白样本中无ABA峰干扰。
2. 稳定性测试：
   • 短期：4℃保存24h，ABA降解≤5%；
   • 长期：-80℃保存1个月，浓度变化≤10%。

六、常见问题与解决方案

七、应用场景与标准参考

1. 植物抗逆研究：
   • 干旱胁迫下叶片ABA累积（＞100ng/g FW）；
   • 盐胁迫根系ABA动态监测（LC-MS/MS时间序列分析）。
2. 农业育种：
   • 筛选高ABA合成基因型（如OsABA2过表达水稻）；
   • 外源ABA处理促进种子休眠（浓度50-100μM）。
3. 标准参考：
   • 国际：ISO 21479-2019（植物激素检测通用方法）；
   • 国内：GB/T 35874-2018（植物内源激素测定）。

总结

脱落酸检测需以 “高效提取、精准分析、严格质控” 为核心：

• 方法选择：ELISA（快速筛查）→LC-MS/MS（高精度科研）；
• 关键参数：LOD≤0.1ng/g、回收率≥80%、RSD≤10%；
• 应用价值：解析植物逆境响应机制、指导作物抗逆育种。

建议方案：

1. 科研场景：优先采用LC-MS/MS，搭配同位素内标确保数据可靠性；
2. 生产监测：ELISA试剂盒（如Agrisera抗体）快速检测大批量样本；
3. 技术优化：结合QuEChERS法简化前处理，提升检测通量。

通过标准化流程与技术创新，可精准量化植物ABA水平，为农业研究与生产提供科学依据。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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