一、检测目的与标准

1. 核心目标
   • 定量或定性检测样品中的吲哚（Indole），常见于微生物鉴定（如大肠杆菌）、尿液分析、环境污染物检测及化工产品质控。
   • 符合标准：
     • 微生物鉴定：CLSI M35-A（临床微生物鉴定标准）、ISO 21528-2（肠杆菌科检测）。
     • 化学分析：GB/T 5750.8-2006（生活饮用水检验方法）、EPA 8310（高效液相色谱法）。
     • 医学检测：WS/T 402-2012（尿液化学分析）。

二、常见检测方法

1. 微生物吲哚试验（定性）

原理：细菌分解色氨酸生成吲哚，与试剂反应显色。 试剂：Kovac试剂（对二甲氨基苯甲醛+戊醇+浓盐酸）。 步骤：

1. 接种细菌于色氨酸肉汤，37℃培养18-24小时。
2. 加入0.5mL Kovac试剂，静置1分钟。
3. 结果判读：液面出现玫瑰红色环为阳性（+），无显色为阴性（-）。

2. 分光光度法（定量）

原理：吲哚与特定试剂显色后，在特定波长下测定吸光度。 试剂：

• Ehrlich试剂：1%对二甲氨基苯甲醛（溶于10%盐酸+乙醇）。
• 标准品：吲哚标准溶液（梯度浓度：0-50mg/L）。

步骤：

1. 样品处理：液体样品离心过滤，固体样品用甲醇/水提取。
2. 显色反应：取1mL样品+1mL Ehrlich试剂，避光反应10分钟。
3. 测定：于560nm测吸光度，对照标准曲线计算浓度。

3. 高效液相色谱法（HPLC）

条件：

• 色谱柱：C18柱（5μm，4.6×250mm）。
• 流动相：甲醇:水（70:30，含0.1%甲酸）。
• 流速：1.0mL/min，检测波长：280nm。

步骤：

1. 样品前处理：水样过0.22μm滤膜，尿样稀释10倍后进样。
2. 标准曲线：0-100mg/L吲哚标准品，线性R²≥0.999。
3. 定量：外标法计算样品浓度，保留时间约6.5分钟。

三、检测流程与操作规范

1. 微生物检测（示例：大肠杆菌吲哚试验）

• 培养基：胰蛋白胨水（含1%色氨酸），灭菌后接种菌株。
• 培养条件：37℃±1℃，需氧培养18-24小时。
• 关键控制点：
  • 试剂现配现用（Kovac试剂避光保存≤1周）。
  • 阴性对照：接种无菌肉汤；阳性对照：已知产吲哚菌株。

2. 尿液吲哚检测（医学应用）

• 样本收集：晨尿10mL，2小时内检测或4℃保存≤24小时。
• 快速试纸法：
  1. 浸渍试纸条于尿液中2秒。
  2. 30秒后对比色卡，紫色为阳性（提示肠道代谢异常或感染）。

四、质量控制要点

1. 标准品校准：每批次检测需建立标准曲线，验证线性范围。
2. 空白对照：试剂空白吸光度≤0.02（分光光度法）。
3. 精密度：重复检测相对标准偏差（RSD）≤5%。
4. 回收率试验：加标回收率85-115%（HPLC法）。

五、常见问题与解决方案

六、安全与注意事项

• 试剂毒性：Kovac试剂含浓盐酸，操作时佩戴手套、护目镜。
• 废弃物处理：显色后废液按有害化学废物处理。
• 仪器维护：HPLC使用后冲洗色谱柱30分钟（甲醇:水=50:50）。

通过规范操作与质量控制，吲哚检测可准确应用于微生物鉴定、临床诊断及环境监测，为多领域提供可靠数据支持。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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